リン脂質代謝酵素による細胞運動の制御機構

磷脂代谢酶控制细胞运动的机制

• 批准号: 13216111
• 负责人: 金保 安則
• 金额: $ 3.01万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13216111/
• 关键词: ラッフル膜; EGF; CrkII; Rac1; ARF; PIP 5-kinase

申請者は平成12年度に、EGF受容体を介したラッフル膜形成シグナル経路において、CrkIIが関与することを見出した。そこで、本年度は、CrkIIがどのような分子メカニズムでEGF受容体を介するラッフル膜形成に関与するのか、その詳細について解析し、以下の結果を得た。EGF受容体は、EGF刺激に伴いその細胞内C末端(細胞内)領域の5カ所のチロシン(Tyr)残基が自己リン酸化されてシグナルを下流へ伝達することが知られている。これらすべてのTyr残基をフェニールアラニンに置換した自己リン酸化されないEGF受容体変異体(F5-EGFR)を単独でCHO細胞に強制発現させてもEGFによるラッフル膜は形成されなかったが、興味深いことに、CrkIIと共発現させるとEGF刺激によりラッフル膜が形成されることを見出した。CrkIIはN末端側に一つのSH2ドメインをもち、そのC末端側に2つのSH3ドメインを有するが、C末端側1つのSH3ドメイン(C-SH3)でも全長CrkIIと同様に、F5-EGFRと共発現させるとEGF刺激によるラッフル膜形成が認められた。さらに、このF5-EGFRとCrkIIあるいはC-SH3を共発現させたCHO細胞におけるEGF依存的なラッフル膜形成は、ドミナントネガティブRac1により阻害された。これらの結果から、EGF受容体を介するラッフル膜形成シグナル伝達において、活性化されたEGF受容体からCrkIIへシグナルが伝達され、その下流でRac1が活性化されてラッフル膜形成に至るものと結論づけられる。また、このシグナル伝達においては、EGF受容体の自己リン酸化は必要でないことが明らかとなった。我々は、これまでにRac1によるラッフル膜形成は、ホスファチジルイノシトール(PI)4-リン酸(PI4P)をリン酸化してPI4,5-二リン酸を産生するPI4P5-キナーゼ(PIP 5-kinase)の活性化因子である低分子量Gタンパク質のARFにより仲介されている可能性を報告しているが、CrkIIを介するラッフル膜形成は、ドミナントネガティブARFによっても阻害された。このことより、EGFによるラッフル膜形成シグナル伝達は、EGF受容体→CrkII→Rac1→ARF→PIP 5-kinase経路であると考えられる。

The applicant has been involved in the formation of EGF receptors in the past 12 years. This year, CrkII was analyzed in detail on the relationship between EGF receptor formation and molecular structure, and the following results were obtained. EGF receptors are known to contain 5 residues in the intracellular C-terminal (intracellular) domain associated with EGF stimulation. In CHO cells alone, stress response to EGF receptor variant (F5-EGFR) was observed. CrkII has a SH2 terminal on the N terminal side, a SH 3 terminal on the C terminal side, and a SH 3 terminal on the C terminal side (C-SH3). In addition, F5-EGFR and CrkII are co-produced in CHO cells, and EGF-dependent membrane formation is inhibited. The results showed that EGF receptor was involved in the formation and activation of CrkII receptor, and Rac1 was activated in the formation and activation of EGF receptor. It is necessary to make sure that the EGF receptor is free from acid. RAC1 is a new type of film forming agent, and PI4P5 is a new type of film forming agent, and PI4P is a new type of film forming agent.(PIP5-kinase) activation factor, low molecular weight G (OH) 2, high molecular weight ARF (OH) 2, low molecular weight G (OH) 2, high molecular weight ARF (OH) 2, low molecular weight G (OH) 2, low molecular weight G ( EGF receptor →CrkII→ Rac1 →ARF→PIP 5-kinase pathway

项目成果

金保安則, 野沢義則: "化学と生物 実験ライン「タンパク質と核酸の分離精製」"470 (2001)

Yasunori Kim、Yoshinori Nozawa：“化学和生物学实验线“蛋白质和核酸的分离和纯化””470（2001）

M.Yamazaki et al.: "Phosphatidylinositol 4-phosphate 5-kinase is essential for ROCK-mediated neurite remodeling"J. Biol. Chem.. (in press). (2002)

M.Yamazaki 等人：“磷脂酰肌醇 4-磷酸 5-激酶对于 ROCK 介导的神经突重塑至关重要”J.

K. Oishi et al.: "PKN regulates phospholippase D1 through direct interaction"J. Biol. Chem.. 276. 18096-18101 (2001)

K. Oishi 等人：“PKN 通过直接相互作用调节磷脂酶 D1”J.

Y.Kanaho, T.Suzuki: "Phosphoinositide kinases as enzymes that produce versatile signaling lipids, phosphoinositides"J. Biochem. (Tokyo), Review. (in press). (2002)

Y.Kanaho，T.Suzuki：“磷酸肌醇激酶作为产生多功能信号脂质、磷酸肌醇的酶”J。

Y.Kanaho, M.: "Phosphatidylinositol 4-phosphate 5-kinases : Regulation and functions"J. Biochem.(Tokyo),Review. (in press). (2002)

Y.Kanaho, M.：“磷脂酰肌醇 4-磷酸 5-激酶：调节和功能”J。