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ウイルスベクターによる高感度HBV複製検出系を用いたcccDNA生成機序の解析

使用病毒载体的高灵敏度 HBV 复制检测系统分析 cccDNA 生成机制

基本信息

批准号：
15K19105
负责人：
近藤小貴
金额：
$ 2.5万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-01 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

B型肝炎ウイルス(HBV)の複製ゲノムであるcccDNA(covalently closed circular DNA)は既存の治療法で標的となっていないため、HBV保因者から完全に排除することは未だ困難である。HBVは動物モデルが確立しておらず、培養細胞でのゲノム複製効率は極めて低いため解析が難しい。特にcccDNA生成過程の詳細は明らかとなっていない。本研究では、肝細胞への遺伝子導入効率が特に高いアデノウイルス(Ad)ベクターを用いて培養細胞でのゲノム複製を高効率に検出する系の確立を目指し、本系を用いて我々が既に同定しているcccDNAの生成に失敗する変異体等の変異型HBVゲノムにおけるゲノム複製を詳細に解析することでcccDNA生成に必要なゲノム領域や因子を同定し、cccDNA生成阻害薬への応用を最終目的として研究を行っている。そのために本研究ではアデノウイルス(Ad)ベクターを用いた新たな高感度HBV複製ゲノム検出系を確立し、本年度論文として報告を行った（Suzuki et al., Sci. Rep., 2017)。この系を用いて複数の変異型HBVゲノムを用いて解析を行うことで今まで複製効率、検出感度が低く詳細が明らかとなっていないcccDNA生成のメカニズムを解明することを想定していたが、本年度は産前、産後及び育児休暇等の取得により研究を行うことが困難となったため、研究費の申請は行わなかった。

Hepatitis B virus (HBV) replication needs to be addressed by cccDNA(covalently closed circular DNA), but it is difficult to eliminate the HBV pathogen completely. HBV replication efficiency in animals is extremely low and difficult to resolve. The process of cccDNA generation is described in detail. In this study, the efficiency of gene introduction into hepatocytes was particularly high, and the efficiency of gene replication in cultured cells was significantly higher than that in normal cells. The results showed that the system was stable, and the generation of cccDNA failed, and the replication of heterogeneic HBV was analyzed in detail. The ultimate goal of cccDNA production inhibition and application is to conduct research. This paper reports the establishment of a new highly sensitive HBV replication model (Suzuki et al., Sci. Rep., 2017)。This is the first time that a large number of heteromorphic HBV viruses have been analyzed. The replication efficiency and detection sensitivity are low. The details are clear. The acquisition of prenatal, postpartum and reproductive systems is difficult. The application for research fees is difficult.