Biochemische Charakterisierung des pIP501-kodierten Transkriptionsrepressors CopR und Evolution des CopR-targets

pIP501 编码的转录阻遏蛋白 CopR 的生化特征和 CopR 靶标的进化

• 批准号: 5114264
• 负责人: Privatdozentin Dr. Sabine Brantl
• 金额: --
• 依托单位: Lehrstuhl für Genetik
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1997-12-31 至 2006-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5114264?language=en
• 关键词: Biochemische; Charakterisierung; des; pIP501; kodierten

Der Transkriptionsrepressor CopR (92 aa, 10.6 kD) ist einer der beiden Regulatoren der Replikation des Streptokokkenplasmids pIP501. CopR reprimiert die Transkription der essentiellen repR-mRNA ca. 10-20fach und verhindert die konvergente Transkription von Sense- und Antisense-RNA. CopR bindet asymmetrisch als vorgeformtes Dimer an zwei Bindungsorten in der großen Furche der DNA. Die Gleichgewichtsdissoziationskonstanten für die CopR-Dimere und den CopR-DNA-Komplex sowie die intrazelluläre Konzentration in B. subtilis wurden bestimmt. Ein 3D-Strukturmodell der ersten 63 Aminosäuren von CopR wurde konstruiert und zur Lokalisation des DNA-Bindungsmotives/Identifizierung von Aminosäuren, die an der spezifischen und unspezifischen Erkennung der DNA beteiligt sind, sowie zur Grobeingrenzung der Dimerisierungsregion verwendet. Eine Funktion des CopR-C-Terminus ist der Schutz vor Proteolyse. Im Rahmen des geplanten Vorhabens sollen 1) die Evolution des CopR-`targets`mittels SELEX-Verfahren untersucht 2) der Repressionsmechanismus von CopR aufgeklärt, 3) die Konformationsveränderung von DNA und CopR bei Bindung von CopR an seinen Operator untersucht 4) weitere Funktionen des sauren C-Terminus von CopR aufgeklärt und 5) der individuelle Beitrag hydrophober Aminosäuren an der Dimerisierung von CopR bestimmt werden.

转录抑制因子CopR（92 aa，10.6 kD）是链球菌质粒pIP 501介导作用的重要调节因子。CopR抑制了必需repR-mRNA的转录。10-20发现并验证了正义和反义RNA的翻译。CopR结合的不对称性使二聚体形成，并在DNA大沟中形成两种结合。Die Gleichgewichtsdissoziationskonstanten für die CopR-Dimere und den CopR-DNA-Komplex sowie die intrazelluläre Konzentration in B.枯草杆菌在CopR的第一个63氨基酸的三维结构模型中，通过对DNA结合动力学的定位和对氨基酸的识别，以及对DNA结合的特异性和非特异性识别，从而对二聚体区域进行了探索。CopR-C-末端的一种功能是对蛋白水解的保护。在植物前体研究中，1）CopR-“靶标”的进化，2）CopR的抑制机制，3）DNA和CopR的构象与CopR的结合，4）CopR的C-末端的功能，5）CopR的二聚体韦尔登的单个疏水基团。