Molekularbiologische Charakterisierung der Orthomyxovirus-Replikation: Das ML-Protein von Thogoto-Virus als Interferon-Antagonist

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Ziel des Projektes ist die Aufklärung der molekularen Mechanismen, auf denen die Regulation der Orthomyxovirus-Replikation beruht. Dazu dient uns das einfach aufgebaute Thogotovirus (THOV) als Modellsystem. Es ist uns gelungen, ausgehend von cDNA, infektiöses, rekombinantes THOV (recTHOV) zu generieren. Mit der Etablierung der "Reversen-Genetik" für THOV kann nun die Bedeutung einzelner Genabschnitte für die Virusreplikation und die Interaktion mit Funktionen der Wirtszelle gezielt untersucht werden. Im Rahmen des vorliegenden Antrages wollen wir folgende Fragestellungen untersuchen: 1. Das 6. Segment von THOV kodiert für das Matrixprotein und ein zweites Genprodukt mit unbekannter Funktion. Die Bedeutung dieses zweiten Genproduktes für die Vermehrung von THOV soll charakterisiert werden. 2. Die genomischen Segmente des THOV unterscheiden sich in der Struktur und der Promotoraktivität ihrer 3'- und 5'-nichttranslatierten Sequenzen. Wir wollen diese Bereiche zwischen den Segmenten austauschen, um ihre Bedeutung für die Steuerung der Virusreplikation zu bestimmen. 3. Die Replikation von THOV wird durch das Interferon-induzierte humane MxA-Protein stark gehemmt. Diese Hemmung geht auf eine Interaktion zwischen MxA und dem viralen Nukleoprotein zurück. Durch Mutagenese des Segmentes, das für das Nukleoprotein kodiert, wollen wir versuchen, MxA-resistente recTHOV zu generieren, um so den Hemmmechanismus von MxaA weiter aufzuklären.