Molekularbiologische, biochemische und biophysikalische Charakterisierung der posttranslationalen Prenylierung von Ypt/Rab Proteinen sowie deren Wechselwirkung mit Effektorproteinen

Ypt/Rab蛋白（Ypt 7 [Hefe]，Rab 5 [Mensch]和Rab 7 [Hund]）的后处理Geranylgeranylierung将在艾伦物培养、Prenylierungsreaktion和复合物动力学、机械学和结构学方面进行全面研究。我们的研究方法包括韦尔登、化学酶法合成和放射性结构分析。我们韦尔登Hefe系统（Ypt 7：MRS 6：Bet 2-Bet 4）和Säugetier系统（Rab 7：REP-1：RabGGT酶）的特点非常明显。在项目中，Ypt/Rab-specifischen GDP/GTP-Austauschfaktoren（GNEF）Rabex-5（Rab 5）、Vps 9（Ypt 51）和Dss 4（Ypt 1）的动力学和结构得到了证实。Neben der vergleichenden Charakterisierung mit anderen GNEFs韦尔登Ypt/Rab-specizienge he Fragestellungen（z.B. Abhängigkeit der Austauschaktivität von Prenylierung und Membranassociation）bearbeitet.通过对Ypt/Rab-specifischen的动力学和结构特性的研究，GTP-activirenden Proteinen（GAP）是分析Ypt/Rab-specifischen对GDP/GTP-Zyklus调节作用的一个较好的工具。我们将韦尔登从Hefe出发建立Ypt 7：Gyp 7模型系统。Weiterhin soll im Rahmen des Projekts die Wechselecting kung of Effektorproteine Rabaptin-5 bzw. Rabaptin-5和EEA 1与Rab-Proteinen Rab 5和Rab 4一起使用生物物理学方法进行韦尔登。Schwerpunkt hierbei liegt auf der Strukturanalysis einzelner wechselkender Domänen mittels NMR und/oder Röntgendffraktion.

Die posttranslationale Geranylgeranylierung von Ypt/Rab Proteinen (Ypt7 [Hefe], Rab5 [Mensch] und Rab7 [Hund]) wird in allen Teilschritten der Komplexbildung, der Prenylierungsreaktion und dem Zerfall des Komplexes kinetisch, mechanistisch und strukturell untersucht. Die wesentlichen Untersuchungsmethoden werden Fluoreszenzspektroskopie, die chemo-enzymatische Synthese und die Röntgenstrukturanalyse sein. Wir werden das System aus Hefe (Ypt7:MRS6:Bet2-Bet4) und aus Säugetier (Rab7:REP-1:RabGGTase) vergleichend charakterisieren. Im Rahmen des Projekts werden die Ypt/Rab-spezifischen GDP/GTP-Austauschfaktoren (GNEF) Rabex-5 (Rab5), Vps9 (Ypt51) und Dss4 (Ypt1) kinetisch und strukturell untersucht. Neben der vergleichenden Charakterisierung mit anderen GNEFs werden Ypt/Rab-spezifische Fragestellungen (z.B. Abhängigkeit der Austauschaktivität von Prenylierung und Membranassoziation) bearbeitet. Die kinetische und strukturelle Charakterisierung von Ypt/Rab-spezifischen, GTPase aktivierenden Proteinen (GAP) ist ein weiterer Schwerpunkt für die Analyse der Regulation des GDP/GTP-Zyklus durch Ypt/Rab-spezifische Proteine. Wir werden hierfür das Modellsystem Ypt7:Gyp7 aus Hefe untersuchen. Weiterhin soll im Rahmen des Projekts die Wechselwirkung der Effektorproteine Rabaptin-5 bzw. Rabaptin-5ß und EEA1 mit den Rab-Proteinen Rab5 und Rab4 mit biophysikalischen Methoden untersucht werden. Schwerpunkt hierbei liegt auf der Strukturanalyse einzelner wechselwirkender Domänen mittels NMR und/oder Röntgendiffraktion.