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HIV感染阻止効果を持つリボザイムの開発と応用

具有抑制HIV感染作用的核酶的开发及应用

基本信息

批准号：
09557084
负责人：
服部俊夫
金额：
$ 7.1万
依托单位：
Tohoku University (1998)Kyoto University (1997)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09557084/
关键词：
HIV ribozyme V3 loop gene therapy gene thotopy V3loop リボザイム AIDS envelope

项目摘要

Ribozymeは配列特異的に標的のRNAをmultiple-turn overで切断する活性があり、その抗HIV-1活性を検討した。私たちはHIVの細胞へのentryの際に重要な役割をするgp120のV3 1oopの中に標的を見つけRibozymeを合成してin vitroとin vivoでその抗ウイルス活性を検討した。Ribozymeを用いて遣伝子治療を行う際に細胞内のribonuclaseに対する安定性を高くするために安定化ribozyme (phosphorothioate DNA/RNAキメラRibozyme)を作成して実験に供した。標的としてはV3 1oopを含む346bpのDNA fragmentをPCRで増幅し、安定化rbozymeは野生化ribozymeよりも切断活性が若干低下するだけであることを確認した。また共焦点顕微鏡を用いて、安定化ribozymeは細胞内でも野性型ribozymeよりも、より安定であることを証明した。高感度な感染系を樹立するためにluciferase遺伝子をもち、ribozymeが作用しないようにV3領域を欠落させた、リポーター遺伝子を用いた。これらの遺伝子と様々なenv遺伝子を細胞に共導入することにより偽ウイルスを作製して、感染実験に供した。合成したRibozymesはenvelope介する細胞融合を抑制し,NL432とSF162ウイルスの感染も効率よく阻止した。また、ribozyme処理細胞ではWestren blotでenv蛋白の発現が低下したので、感染阻止はribozymeによるenv発現の特異的抑制効果によると考えられた。これらのribozymeによる感染予防も視野に入れ応用をめざしたい。

Ribozyme contains a specific target RNA and multiple-turns over it to cut off its activity and its anti-HIV-1 activity. Private たちはHIV のcell へのentry の国际にimportant なservice cut をするgp120のV3 1oopの中に名的を见つけRibozymeを综合してin vitroとin Vivo's anti-resistance activity is active. Ribozyme (phosphorothioate) DNA/RNAキメラRibozyme) is produced and supplied. Target としてはV3 1oopをcontains む346bpのDNA Fragmented PCR has been used to increase the amplitude of PCR, and stabilized rbozyme and wild-type ribozyme have been confirmed to have a slightly lower cutting activity. Confocal microscopy has been proven using stable ribozyme, intracellular wild-type ribozyme, and stable ribozyme. High sensitivity infection system をestablishment するためにluciferase 缝子をもち、ribo The role of zyme is the V3 field's させた, and the zyme's remaining parts are いた. The これらの伝子と様々なenv伝子をcells are introduced into the することによりpseudo ウイルスをproduced して, and the infection 実験にsupply した. Ribozymes are synthesized to inhibit cell fusion, and NL432 and SF162 are used to prevent infection and prevent infection.また, ribozyme-treated cells have a Westren blot and the env protein has been reduced, and the infection has been prevented. Ribozyme has a specific inhibitory effect and the env protein has been tested.これらのribozyme によるInfection prevention ももにれ応をめざしたい.