モノクローナル抗体による神経成長因子受容体機能の研究

利用单克隆抗体研究神经生长因子受体功能

• 批准号: 60226015
• 负责人: 小池 達郎
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: 佐賀医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1985
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1985 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-60226015/
• 关键词: 神経成長因子; 受容体; 上頚神経節; フェオクロモサイトーマ; アフィニティー・クロマトグラフィー; レクチン; HPLC

神経成長因子(NGF)は交感神経節及び知覚神経節を含む神経冠由来の細胞の成長、発育、分化を調節しているタンパク質である。NGFは細胞表層にある特異的受容体(NGF・R)との結合によりその作用を細胞内に伝え、分化した形質の発現を調節していると考えられる。NGF作用機構の解明にはまずNGF・Rの役割を明らかにする必要があると考え1.受容体の再構成と精製の試み及び2.モノクローナル抗体の作成を行った。1.受容体の再構成と精製の試み。上頚神経節を用いてポリエチレングリコールにより膜分画と3T3細胞を融合させると、RI標識した膜及びNGF結合活性の測定から15-35%の膜が取り込まれることが明らかになった。125I-NGFとの結合は飽和性であり、NGFの結合をモ ュレートするWGLを加えるとNGFの結合量は約80%増加し、さらに高親和性成分の割合も増加した。膜分画を可溶化した後NGFアフィニティークロマトグラフィーで部分精製した成分をリン脂質膜に組み込むと、NGFとの結合から高い親和性(Kd0.28nM)と低い親和性(Kd3.2nM)の2つのサイトを再現できた。WGLは高い親和性部位を増加せしめた。この再構成膜をさらに3T3細胞に植え込むこともできた。膜可溶化成分を高速液クロ(HPLC)で分析すると2つの成分が結合活性を示した、ハイドロキシアパタイトや陰イオン交換クロマトでは失活が激しく、ゲルロ過とアフィニティークロマトグラフィーのみがかなり精製されたNGF・Rを与えた。2.モノクローナル抗体作成。この様に部分精製したNGF・R成分を用いてin vitro immunization法によりモノクローナル抗体を作成した、現在ELISA法によって、ハイブリドーマのアッセィを行っている。さらに抗体の生理的作用についても調べる予定でいる。

God 経 growth factor (NGF plays) は sympathetic 経 section and び know 覚 god 経 section contains を む 経 crown origin の の cell growth, differentiation of 発 breeding, を adjust し て い る タ ン パ ク qualitative で あ る. Model NGF は cell surface に あ る specific by let body (NGF plays R) と の combining に よ り そ の role を intracellular に 伝 え, differentiation し た character の 発 を now adjust し て い る と exam え ら れ る. The mechanism of NGF is explained by <s:1> に に まず まず the function of NGF · R is explained by を ら にする にする it is necessary to があると study え1. The recipient <s:1> is then formed into と refined <s:1> test み and び2. Youdaoplaceholder3 <s:1> ロ ナ ナ ナ ナ <s:1> antibody <e:1> is made into を line った. 1. The acceptor is <s:1> reconstituted and と refined み test み. 頚 section 経 を god with い て ポ リ エ チ レ ン グ リ コ ー ル に よ り membrane painting と 3 t3 cell fusion を さ せ る と, RI identification し た film and び model NGF combination with the determination of the active の か ら が take 15-35% の membrane り 込 ま れ る こ と が Ming ら か に な っ た. I - 125 model NGF と の combining は saturability で あ り, NGF plays の combining を モ ュ レ ー ト す る WGL を plus え る と model NGF の combining は about 80% raised し, さ ら に high affinity ingredients の cut close も raised added し た. Model NGF after membrane points draw を solubilization し た ア フ ィ ニ テ ィ ー ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー で part refined し た composition を リ ン lipid membrane に group み 込 む と, NGF plays と の combining か ら い high affinity (Kd0.28 nM) と い low affinity (Kd3.2 nM) の 2 つ の サ イ ト を reappearance で き た. WGL <s:1> high を affinity sites を increase せ めた めた. <s:1> <s:1> reconstitute the membrane をさらに3T3 cells に graft え込む <s:1> と で で た た た. Liquid membrane solubilization composition を high-speed ク ロ (HPLC) analysis で す る と 2 つ の composition が binding activity を shown し た, ハ イ ド ロ キ シ ア パ タ イ ト や Yin イ オ ン exchange ク ロ マ ト で は inactivation が excitation し く, ゲ ル ロ too と ア フ ィ ニ テ ィ ー ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー の み が か な り refined さ れ た NGF plays R を and え た. 2. The antibody is prepared by モノ ロ ナ ナ. こ の others に part refined し た model NGF · R component を with い て in vitro immunization method に よ り モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody を made し た, now ELISA method に よ っ て, ハ イ ブ リ ド ー マ の ア ッ セ ィ を line っ て い る. The physiological functions of さらに antibodies are に,, て, <s:1>, べる, and で, る, る.

项目成果

Neuroscience Research. (1986)

神经科学研究。

Zoological Science. 2-6. (1985)

动物学。

B.B.A.(BBA11577). 847-1. (1986)

工商管理学士（BBA11577）。

Neuroscience ResearchS. 114. (1985)

神经科学研究 S.

Neuro Chem.Research. 11-1. (1986)

神经化学研究。