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筋小胞体Caポンプの分子機作の研究

肌浆网钙泵分子机制研究

基本信息

批准号：
62617524
负责人：
重川宗一
金额：
$ 0.7万
依托单位：
National Cardiovascular Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62617524/
关键词：
筋小胞体 Ca^<2+>ポンプ Ca^<2+>ATPase

项目摘要

筋小胞体Ca-ATaseの分子機構を明らかにする目的で, 今回二つの研究を行なった.1.NBD-clで修飾したCa-ATaseの反応機構. ウサギ骨格筋小胞体より精製したCa-ATaseの特異的システィン残基をNBD-clで蛍光標識した. 修飾酵素はATP反応性りん酸化中間体(E1P)からのCa遊離過程が著しく阻害されている以外はほぼ正常に近い性質を保持していた. EGTA前処理酵素にCaを加えるとNBDの蛍光強度は2.2倍に増加した. この蛍光増大のCa^<2+>濃度依存性から高親和性部位へのCa^<2+>結合に伴い, NBD修飾部位近傍に大きな構造変化が起こることが示唆された. 他方, ATP添加後に生成するE1Pの蛍光レベルは高くりん酸化していないE_1Ca^<2+>とほぼ同じであっが, 無機りん酸化によんて生成するADP非反応性のE_2Pのそれは, Ca非結合酵素(E_2)およびバナデート結合酵素(E_2V)と同じ低いレベルであった. 以上の結果により, 酵素のりん酸化の有無にかかわらず, Ca^<2+>の結合・解離によってNBD修飾部位近傍の構造が大きく変化することが示唆しれた.2.Ca-ATase反応のTCSによる活性化. 我々は, Ca^<2+>輸送ならびにATP分解活性が, H^+のイオノフォアとして知られるTCSによって3〜5倍に促進されることを見出した. 興味深いことに, 活性化作用は比較的低い温度でのみ見られた. 6°Cでは, ATPase反応の個々の部分反応のおよその速度定数はE^<2Ca>_1→E_2P, 0.235^<-1>, E_2P→E_<2+>P2, 1.35^<-1>, E_2→E_1, 1.95^<-1>であったが, 30μMTCSは速度定数をそれぞれ1.35^<-1>, 2.25^<-1>, 2.25^<-1>に変化させた. 以上の結果は, TCSによる活性上昇の主原因が律速段階であるE^<2Ca>_1→E_2Pステップの活性化であることを示している. また他の実験から, TCSは親脂性の化合物ではあるがこれまで活性化作用の知られている界面活性剤とは異なる機構によって酵素を活性化することが示唆しれた. TCSはE_1→の異性化反応にはあまり影響せずE^<2Ca>_1からのCu^<2+>遊離過程を選択的に活性化するので, 今後のスッテプのactivaforとして利用できると思われる.

The molecular mechanism of the small cell body Ca-ATase is clear about its purpose. This time, it has been studied and studied. The 1.NBD-cl has repaired the anti-mechanism of the Ca-ATase. Small cells of skeletal tendons and skeletal tendons are very sensitive to the characteristics of Ca-ATase. They contain residues, NBD-cl, light recognition. Enzyme ATP reactive acidification medium (E1P) reverse acidification Ca isolation process causes normal closeness and closeness in addition to blocking damage. Before EGTA, the enzyme Ca was added, and the light intensity was 2.2 times that of NBD. The combination of Ca ^ & lt;2+> degree dependence and sex parts Ca ^ & lt;2+> is a good way to improve the accuracy of NBD repair. On the other hand, after the addition of ATP, E1P photosensitizer acidified E1Ca^ & lt;2+> homologous E1Ca^, random acidified E2P and Ca non-binding enzyme (E2V) were generated, respectively, and the enzyme (E2V) was the same as that of low temperature. As a result of the above results, enzyme acidification has a significant effect on enzyme acidification, and the combination of Ca ^ & lt;2+> in combination with the NBD repair site shows that the enzyme acidification is effective. 2.Ca-ATase reverses the activation of TCS. We ask, Ca ^ & lt;2+> to send you your ATP decomposition activity, H^ + your ATP decomposition activity, and you will know that your TCS activity will increase by a factor of 5. The flavor is deep, the active effect is lower than the temperature, and the active effect is low. 6 °C, ATPase reverse two-cycle partial reverse response speed rating E ^ & lt;2Ca>_1 response 2P, 0.235 ^ & lt;-1>, Emission 2P response ltter2 switch P2, 1.35 ^ & lt;-1>, Emission 2 response 1.95 ^ & lt;-1> response, 30 μ MTCS speed rating 1.35 ^ & lt;-1&gt , 2.25 ^ & lt;-1>, 2.25 ^ & lt;-1> to make it easier. According to the above results, the main reason for the activity of TCS is that the rhythm of the speed segment is similar to that of the speed segment (E ^ & lt;2Ca>_1). The results show that there is a significant increase in the activity of the enzyme. The effect of TCS on the activation of aliphatic compounds was studied. The activation of enzymes was demonstrated by the activation of enzymes. TCSs E _ 1 response will affect the activation response of the selected lt;2Ca>_1 E ^ & lt;2Ca>_1 response Cu ^ & lt;2+> filter. In the future, you will use this information to help you think about how to use it.