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試験管内DNA複製系を用いた癌遺伝子作用の研究

利用体外DNA复制系统研究癌症基因作用

基本信息

批准号：
01015035
负责人：
吉田松年
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトcーmyc遺伝子の2Kb上流に存在する自律増殖能を有するDNA配列(cーmycARS)を用いて試験管内DNA複製系を作製すべく研究を進めている。その過程でARSに特異的に結合するタンパク因子の精製を行った。ARS中のヘアピン構造を取り得る部位30ーmerを化学合成しセファロースに固定化してARSカラムを作製した。Rajc細胞核抽出物を硫安分画、ゲルろ過、モノQカラム(FPLC)で部分精製した後、ARSカラムにてARS特異的結合タンパクをアフィニティ精製したところ、分子量68Kのタンパクが精製された。このタンパク(p68)は0.3MNaCl存在下で特異的に上記30ーmerと結合し、他の塩基配列を有するDNAにより競合されなかった。p68はウェスタン・ブロッティングにより2種の抗ヒトcーmycモノクローナル抗体と反応する事からcーmycタンパクそのものである可能性が強く示唆された。抗cーmyc抗体はp68とDNAとの結合を強く抑制した。同抗体はcーmycARS複製系に加えると反応を抑制し、この阻害は抗原であるcーmycペプチドを添加する事により回復する事からcーmycタンパクは複製に深く関与している事が示唆された。p68とcーmycタンパクとの関連についてはペプチドマッピング及びタンパク一次構造の解析が進行中であり近い将来において明確となるであろう。p68がcーmycARSを用いた試験管内複製系においてどの様な役割を果しているのかに関しては、DNAポリメラーゼalpha・プライマーゼ、DNAヘリカーゼとの相互作用につき研究が進行中である。

DNA alignment (c mycARS) was studied by using DNA replication system in vitro. The process of ARS is specific to the combination of factors. The structure of ARS was obtained by chemical synthesis of 30-mer, and the structure of ARS was immobilized. Rajc cell nuclear extract is purified, purified, partially purified, ARS specific binding, molecular weight 68K. In the presence of 0.3M NaCl, the DNA binding activity of this protein (p68) was specifically determined by DNA sequencing. p68 is a strong indicator of the possibility of two types of resistance: resistance and reaction. Anti-c-myc antibodies bind strongly to p68. The same antibody is added to the mycars to inhibit replication. p68-myc-myc p68-mycARS is used to test the replication system in the tube. The study of DNA interaction is in progress.