DNAプライマーゼ及びテロメラーゼを分子標的とする新規阻害物質の探索

寻找针对 DNA 引物酶和端粒酶的新型抑制剂

• 批准号: 08266226
• 负责人: 吉田 松年
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08266226/
• 关键词: DNAプライマーゼ; スフィンゴシン; テロメラーゼ; 細胞増殖; 制がん剤; 阻害剤

レプリコン及び岡崎断片の複製開始に関与するDNAプライマーゼ及びがん細胞や生殖細胞のクロマチン複製の最終段階に働くテロメラーゼを分子標的とする新しい制がん剤を開発する事を目的として研究を開始し、以下の進展を得た。1)DNAプライマーゼ阻害剤:平成8年度においては従来プライマーゼ阻害を認めたスフィンゴシンをリ-ド化合物とし、海洋微生物の産生するスフィンゴシン関連の天然物及び化学合成された十数種類の誘導体の酵素阻害を用いて、それらの阻害作用を精製酵素のレベル及び培養細胞の増殖とアポトーシスのレベルで比較したところ、酵素阻害と細胞増殖阻害の程度は良い相関を示し、スフィンゴシンの細胞増殖抑制の少なくとも一つのターゲットはDNAプライマーゼ阻害である事が強く示唆された。種々の化合物を検討した限りではスフィンゴシンが最も作用が強いが、今後さらに細胞膜透過性ならびに阻害の特異性を種々の化合物について検討し有力な候補を探る。2)テロメラーゼ阻害剤:テロメラーゼ研究における最大の問題点は活性測定法にある。現在用いられているTRAP法は定性的には優れるが定量性に問題があり、阻害剤の検索には適しない。我々はこれを克服するためシンチレーション:ビーズを用いてTRAP法に定量性を付与したSPA法を考案した。テロメラーゼはラット腹水肝がん細胞の抽出物より、ゲルろ過を主体とした数段階のカラムクロマトグラフィーを用いて高度に精製することに成功した。この酵素を用いて阻害剤のスクリーニングを開始した。検索の対象としては、細胞増殖を阻害することが認められている海洋バクテリアの産生する天然物を主体とするが、逆転写酵素の阻害剤であるジデオキシヌクレオチド、AZT、等の糖部変換体についても検討している。

レ プ リ コ ン and び okazaki fragment の duplicate に masato and す る DNA プ ラ イ マ ー ゼ and び が ん や reproductive cells の ク ロ マ チ ン copy の eventually Duan Jie に 働 く テ ロ メ ラ ー ゼ を molecular mark と す る new し い system が ん tonic を open 発 す る matter を purpose と し て research を began し, the following の を た. 1) DNA プ ラ イ マ ー ゼ resistance against tonic: 8 annual pp.47-53 に お い て は 従 to プ ラ イ マ ー ゼ resistance against を recognize め た ス フ ィ ン ゴ シ ン を リ - ド compound と し, Marine microorganism の produce す る ス フ ィ ン ゴ シ ン masato even の natural things and び chemical synthesis さ れ た dozens kinds の inductor resistance against を の enzyme with い て, そ れ ら の resistance against の を refining enzyme レ ベ ル and び culture cell の raised colonization と ア ポ ト ー シ ス の レ ベ ル で compare し た と こ ろ, enzyme inhibitor against と cells raised colonization resistance good degree of harm の は い masato を し, ス フ ィ ン ゴ シ ン の cells inhibit の less rights colonization な く と も a つ の タ ー ゲ ッ ト は DNA プ ラ イ マ ー ゼ resistance against で あ る matter が く and shown strong sucking さ れ た. Kind of 々 の compound を beg し 検 た limit り で は ス フ ィ ン ゴ シ ン が the role of が strong も い が, future さ ら に cell membrane permeability な ら び に resistance against の specificity を kind 々 の compound に つ い て beg し 検 powerful な alternate を る. 2)テロメラ ゼ ゼ inhibitor :テロメラ ゼ ゼ study における maximum <s:1> problem point activity determination method にある. Now with い ら れ て い る TRAP method は qualitative に は optimal れ る が quantitative に problem が あ り, resistance against tonic の 検 cable に は optimum し な い. I 々 は こ れ を overcome す る た め シ ン チ レ ー シ ョ ン : ビ ー ズ を with い て TRAP method に quantitative を give し た SPA method を test case し た. テ ロ メ ラ ー ゼ は ラ ッ ト ascites liver が ん cells の extract よ り, ゲ ル ろ too を subject と し た number Duan Jie の カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー を with い て highly に refined す る こ と に successful し た. The <s:1> enzyme を is started with the <s:1> て inhibitor ス ス リ ニ ニ グを グを グを グを グを グを グを. 検 cable の is like と seaborne し て は, cell を rights colonization resistance against す る こ と が recognize め ら れ て い る Marine バ ク テ リ ア の produce す る natural things を subject と す る が, inverse planning write enzyme の resistance against tonic で あ る ジ デ オ キ シ ヌ ク レ オ チ ド, AZT, etc. の sugar - in body に つ い て も beg し 検 て い る.

项目成果

T.Sakurai: "Antioncogene product p53 binds DNA helicase." Experimental Cell Research. 215. 57-62 (1994)

T.Sakurai：“抗癌基因产物 p53 结合 DNA 解旋酶。”

M.Shoji-Kawaguchi: "Selective inhibition of DNA polymerase epsilon by phosphatydyl inositol." Journal of Biochemistry. 117. 1095-1099 (1995)

M.Shoji-Kawaguchi：“磷脂酰肌醇对 DNA 聚合酶 epsilon 的选择性抑制。”

S.Mizuno: "Portal vein occlusion induces cell proliferation of cholestatic rat liver." Journal of Surgical Research. 60. 249-257 (1996)

S.Mizuno：“门静脉阻塞会诱导胆汁淤积的大鼠肝脏细胞增殖。”

C.M.G.Simbulan: "Sphingosine inhibits the synthesis of RNA primers by primase in vitro." Biochemistry. 33. 9007-9012 (1994)

C.M.G.Simbulan：“鞘氨醇在体外抑制引物酶合成 RNA 引物。”

H.Suzuki: "Internal biliary drainage,unlide external drainage,does not suppress the regeneration of cholestatic rat liver after partial hepatectomy." Hepatology. 20. 1318-1321 (1994)

H.Suzuki：“胆内引流，解除外引流，不抑制部分肝切除后胆汁淤积大鼠肝脏的再生。”