DNA複製反応の促進及び抑制のメカニズムと癌化

促进和抑制DNA复制反应和癌症形成的机制

• 批准号: 04151027
• 负责人: 吉田 松年
• 金额: $ 14.08万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04151027/
• 关键词: SV40DNA; 試験管内DNA複製系; RBタンパク; DNAポリメラーゼα; DNAヘリカーゼ; T抗原; 色素性乾皮症; DNA修復

試験官内複製系として最も解析が進んでいるSV40DNA複製系は当研究班でもIn vivoに近いシステムを目指して開発が進められ、momopolymerase system及びdipolymerase system,さらに、ミニクロマチン複製系を確立して複製調節の研究ならびに制癌物質の解析に供してきた。このシステムは一方において強力な癌タンパクであるT抗原に存在して反応が進行する。複製におけるT抗原の役割は、(1)複製起点塩基配列を認識して結合し、部分的な開裂を引き起こす、(2)DNAポリメラーゼα・プライマーゼと結合してSV複合体を形成する、(3)DNAヘリカーゼとしてDNA伸長反応に関与する等、多段階に作用する。今年度はこれらの内、DNAポリメラーゼとの相互作用に注目し、癌抑制遺伝子産物RBと関連において解析した。T抗原はDNAポリメラーゼα・プライマーゼの反応を数倍に促進するが、これはDNAポリメラーゼα分子と鋳型DNAとの親和性を増加させる事によるものであり。プライマーゼに対する直接作用ではない。RBタンパクがT抗原に結合すると、T抗原による促進作用は完全に消失した。この事はT抗原を有しない正常な細胞においても、RBは複製促進因子と結合してDNA複製を制御している可能性を示唆するものである。一方、RB結合タンパクのcDNA2種(Rax-I,Rax-II)を分離して性質を詳細に検討中である。今一つの癌抑制遺伝子産物p53については、ヒト細胞においてDNAヘリカーゼと結合している事を示唆する結果をえた。これら癌抑制タンパクが、転写レベルのみならず複製に対してより直接的に作用する可能性を示すものである。SV40複製系の延長として、Hela及び293細胞抽出液を用いて無細胞DNA修復系を確立した。この系はXP-AからG群の修復欠損をin vitroで再現する事ができた。またこの系において、大腸菌にて大量発現したxpac蛋白がXP-A群の細胞抽出液の修復欠損を特異的に相補した。今後、XP各群の欠損蛋白の解析が期待される。

Test officer within the replication system と し て most も parsing が into ん で い る SV40DNA replication system は when seminar で も In vivo に nearly い シ ス テ ム を refers し て open 発 が into め ら れ, momopolymerase system and び dipolymerase System, さ ら に, ミ ニ ク ロ マ チ ン replication system を establish し て copy regulating の research な ら び に cancer causing substances の parsing に for し て き た. こ の シ ス テ ム は side に お い て powerful な carcinoma タ ン パ ク で あ る T antigen に exist し て anti 応 が for す る. Copy に お け る T antigen の は cut, the starting point (1) duplicate salt base with column を know し て し, part of な cracking を lead き こ す, (2) DNA ポ リ メ ラ ー ゼ alpha, プ ラ イ マ ー ゼ と combining し て SV complex を form す る, (3) DNA ヘ リ カ ー ゼ と し て DNA elongation anti 応 に masato and す る etc, many Duan Jie に role す る. , DNA within our は "こ れ ら の ポ リ メ ラ ー ゼ と の に attention し interaction, cancer inhibition but the latter's 伝 RB と masato even に お い て parsing し た. T antigen は DNA ポ リ メ ラ ー ゼ alpha · プ ラ イ マ ー ゼ の anti 応 several times を に promote す る が, こ れ は DNA ポ リ メ ラ ー ゼ alpha molecular と type where DNA と の affinity を raised plus さ せ る matter に よ る も の で あ り. Youdaoplaceholder0 プラ ゼに ゼに ゼに ゼに has a direct effect on する で で な な プラ. RBタ パ パ が がT antigen に binding すると, T antigen による promoting effect た complete に disappearance た た. What こ の は T antigen を し な い な normal cells に お い て も, RB は replication factor と combining し て DNA replication を suppression し て い を る possibility in stopping す る も の で あ る. Side, as well as the combination of RB タ ン パ ク の cDNA2 kind (Rax - I, Rax - II) を separation し て nature を detailed に 検 beg in で あ る. Today a つ の cancer inhibition of heritage 伝 zi chan content p53 に つ い て は, ヒ ト cells に お い て DNA ヘ リ カ ー ゼ と combining し て い を る things in business す る results を え た. こ れ ら cancer inhibition タ ン パ ク が, planning to write レ ベ ル の み な ら ず copy に し seaborne て よ り direct role in に す を る possibility in す も の で あ る. The SV40 replication line was extended by と て て, Hela and び293 cell extracts を, and the た was established by を て cell-free DNA repair line を. The <s:1> <s:1> is the <s:1> XP-A ら らG group <s:1> repair of the damaged をin vitroで reappearance する event がで た た た. ま た こ の is に お い て, coliform に て large 発 now し た xpac protein が XP - A group of の cell extract の repair owe loss を fill specific に phase し た. Looking forward to the analysis of the damaged proteins in each XP group in the future が and される.

项目成果

Ericka Savoysky: "Immunopurified Rb protein inhibits SV40 T antigen-dependent stimulation of DNA polymerase α" Oncogene. 8. 319-325 (1993)

Ericka Savoysky：“免疫纯化的 Rb 蛋白抑制 SV40 T 抗原依赖性 DNA 聚合酶 α 刺激”Oncogene。 8. 319-325 (1993)

Akiyama,T.: "Phosphorylation of the retinoblastoma protein by cdk2." Proc.Natl.Acad.Sce.USA.89. 7900-7904 (1992)

Akiyama,T.：“cdk2 磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白。”