筋収縮時のミオシン・サブフラグメントー1の運動

肌肉收缩期间肌球蛋白亚片段 1 的运动

• 批准号: 63540666
• 负责人: 山本 啓一
• 金额: --
• 依托单位: The Open University of Japan
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63540666/
• 关键词: スピンラベル; ミオシン・サブフラグメントー1; 筋収縮

サブフラグメントー1の角度変化(首振り)を検出するのに最も適している方法はESRスペクトルによるものであるが、問題はスピン化合物をどの様に筋肉中のサブフラグメントー1に導入するかという点にある。筋肉中にはいろいろなタンパク質がある。スピン化合物がサブフラグメントー1以外の部分にもはいってしまうと本来のサブフラグメントー1の動きによる信号が他のものによる信号によって隠されてしまうのでこの点をどうするかが研究のポイントになる。色々と検討した結果、本実験は帆立貝の筋肉とニワトリ砂嚢平滑筋のミオシン軽鎖を用いて行なわれた。帆立貝の筋肉を50%グリセリン溶液に漬けた後生理的イオン強度の液に戻すと、浸透圧により細胞膜が破れ外部からいろいろな薬物、タンパク質を導入できるようになる。こうした筋肉をEDTAで処理するとミオシンサブフラグメントー1部分から軽鎖がはずれる。そこへ予めスピン標識したニワトリ砂嚢ミオシンの軽鎖を導入する。スピン標識はシステイン残基のSH基と反応するMaleimide Tempoによって行なった。軽鎖を置換したグリセリン筋のCa感受性を調べたところ、導入された標識軽鎖のうち85%以上が元の軽鎖が抜けた後に正しく結合したということが分かった。こうして再構成されたグリセリン処理筋のESRスペクトルを調べた。収縮中の筋肉では、軽鎖上に標識されたスピン化合物からの信号はサブフラグメントー1がかなりいろいろな方向を向いていることを示唆しているように見える。これは首ふりモデルを支持する結果であるが、まだ実験の回数が少ないのではっきりと結論を出すには条件を変えてもう少し実験を行なう必要がある。

通过ESR Spectrum，最合适的检测亚帧1的角变化（摇摆）的方法是，但问题在于如何将自旋化合物引入肌肉中的旋转1。肌肉中有许多不同的蛋白质。如果旋转化合物属于亚框架1以外的部分，则由其他因素引起的信号隐藏了由亚纹理1的原始运动引起的信号，因此，研究的关键是查看该怎么做。经过各种研究，使用扇贝肌肉和鸡皮平滑肌的肌球蛋白轻链进行了该实验。当将扇贝肌肉浸入50％的甘油溶液中，然后以生理离子强度返回液体时，渗透压会导致细胞膜破裂，从而从外部引入各种药物和蛋白质。用EDTA处理这些肌肉将从肌球蛋白亚碎片1部分中去除轻链。在此引入了预旋甲甲肌球蛋白的鸡旋肌球蛋白的轻型轻链。自旋标记是由MaleImide Tempo进行的，该节奏与半胱氨酸残基的SH组反应。当研究了已被轻链代替的甘油肌肉的敏感性时，发现在去除原始轻链后，正确绑定了超过85％的引入标记的轻链。检查了甘油处理的肌肉的ESR光谱。在收缩肌肉时，来自轻链上标记的自旋化合物的信号似乎表明亚纹理1指向许多不同的方向。这是支持颈部震动模型的结果，但是由于实验仍然较少，因此有必要改变条件并进行更多实验以得出明确的结论。