アクチン結合によるミオシンのATP分解部位の構造変化

肌动蛋白结合导致肌球蛋白 ATP 降解位点的结构变化

• 批准号: 03640613
• 负责人: 山本 啓一
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Soka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03640613/
• 关键词: 筋収縮; ミオシン; ATP

本研究の目的は(1)ミオシンのATP分解部位とアクチン結合部位の位置関係と(2)アクチン結合によるATP分解部位の構造変化を明らかにする事である。そのためにATPを嵩ばったものに繋いでアクチンと結合したミオチン分解させるといった方法をとった。嵩ばったものとしては,非常に反応性の高いSH基を1個だけ持つコウジカビのアミラ-ゼ(分子量約5万)を用い,そのSH基にアミノヘキシルカルバモイルメチルATPを二価性架橋試薬,サクシニミジル4ー[Pーマレイミドフェニル]ブチレイトによって結合させた。未反応の試薬はゲル滬過法によって除去し,アミラ-ゼATPはDEAEイオン交換カラムを使った高速液体クロマトグラフィ-によって精製し,限外滬過法によって濃縮してから使用した。タンパク質濃度とリン酸含量とからこの物質がアミラ-ゼとATPの1対1結合物であることを確めた上でミオシン及びアクトミオシンに分解させた。結果は予期に反し,ミオシンによる分解速度とアクトミオシンによる分解速度があまり変わらなかった。この反応条件下ではアクトミオシンの方が数十倍活性が高いはずであるのにそうならないのはアクチンがアミラ-ゼと結合したATPの接合を妨げているためではないかと考えられた。そこで,アミラ-ゼとATPを繋いでいる鎖(ジアミノヘキサン)をジアミノブタンやエチレンジアミンに替えて短くしたところさらにアクトミオシンのATP分解活性が下ったので上記の推察が正しいという事が確められた。ATP結合部位とアクチン結合部位はかなり近いのではないかと思われる。

The purpose of this study is to (1) clarify the positional relationship between ATP decomposition site and ATP binding site, and (2) clarify the structural transformation of ATP decomposition site in ATP binding site. The first step is to open the door and open the door. In addition, it is also possible to use a very reactive high SH group with a molecular weight of about 50,000. The SH group is used in a binary bridging test, and the SH group is used in a binary bridging test. Unreacted test chemicals are removed by the Gel-Shanghai method, and the high-speed liquid cocoa powder is refined by the Amira-ATP and DEAE ION exchange machine, and is concentrated and used only by the Gel-Shanghai method. The substance concentration, acid content, and ATP content of the compound are determined by the decomposition of the compound. The result is that the decomposition speed of the product is higher than that of the original product. Under these conditions, the activity of the enzyme is tens of times higher than that of the enzyme. The ATP dissociation activity of the ATP molecule is determined by the detection of the ATP molecule. ATP binding site