カルモジュリンとカルモジュリン結合蛋白質の相互作用

钙调蛋白和钙调蛋白结合蛋白之间的相互作用

• 批准号: 61215031
• 负责人: 山本 啓一
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61215031/
• 关键词: カルモジュリン; カルモジュリン結合蛋白; 一次構造上の相互作用部位

カルモジュリンはカルシウムイオンを結合すると構造変化をおこし種々の酵素と相互作用してその活性を調節する蛋白質である。その相互作用部位がカルモジュリンの一次構造上のどこにあるのかを水溶性カルボジイミドによる化学架橋によって調べた。カルモジュリンは小麦胚芽のものを用いN末端を蛍光標識しておく。カルモジュリンと相互作用する蛋白質としてミオシン軽鎖キナーゼとトロポニンIを用いた。カルモジュリンとミオシン軽鎖キナーゼ又はトロポニンIをカルシウムイオン存在下で混合し、水溶性カルボジイミドを加えて架橋した。反応させた溶液をSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけるとミオシン軽鎖キナーゼやトロポニンIの少し上にカルモジュリンの蛍光を含んだ新しいバンドが見られ、それが架橋産物であることを示している。この部分を切りとり電気泳動的に溶出して架橋産物を得た。架橋産物をもう一度電気泳動にかけ純化した後臭化シアンで部分分解すると様々な長さのカルモジュリン断片が得られる。このうち蛍光を発するもの、すなわちN末端を含むものに注目する。架橋されていないカルモジュリンではN末端から37,52,73,77,110,125,146,147番目のメチオニン残基のところで切断された断片があらわれるが、架橋産物からは77までは同じ位置にあらわれるが110から上のものは全然違う位置にあらわれる。これは77から110までのあいだに架橋された蛋白が結合していて分子量が変ったせいであると考えられる。したがってカルモジュリンとミオシン軽鎖キナーゼ又はトロポニンIが相互作用する部位のうち少なくとも静電引力による部位は77から110のあいだにあると言える。この部位はカルモジュリンのカルシウム結合部位【I】【II】と【III】【IV】をつなぐαラセン状部分にあたる。

カルモジュリンはカルシウムイオンをcombinationするとstructural changeをおこThe activity of enzymes and enzymes interacts with each other to regulate the activity of proteins.そのInteraction part がカルモジュリンの上のどこにあるのかをWater-soluble カルボジイミドによるchemical bridge によって Adjustment べた.カルモジュリンはWheat germ のものを is marked with いN-terminal を蛍光しておく.カルモジュリンとInteractionするproteinとしてミオシン軽LOCKキナーゼとトロポニンIを用いた.カルモジュリンとミオシン軽 lock キナーゼ和はトロポニンIをカルシウMixing in the presence of ムイオン, water-soluble カルボジイミドをadded えて bridging. Anti-reflective solution SDS ポリアクリルアミドゲル电気Swimming swimsuit Iの小し上にカルモジュリンの蛍光を干んだ新しいバンドが见られ、それが的bridging product であることをshow している. This part is cut and the bridging product is obtained by electrophoresis and dissolution. The bridging product, をもう, was first purified by electrophoresis and then odorized, and the シアンで was partially decomposed and the すると様々な长さのカルモジュリン fragment was obtained by られる.このうち蛍光を発するもの, すなわちN Terminal を contain むものに Notice する. Bridge N-terminal N-terminal bridge 37,52,73,77,110,125,146,147 No. のメチオニン residue residueろで Cut off された fragment があらわれるが、Bridge product からは77までは同じThe location of the location is completely contrary to the location of the location.これは77から110までのあいだに bridging されたprotein がbinding していて molecular weight が変ったせいであると卡えられる.したがってカルモジュリンとミオシン軽 lock キナーゼ和はトロポニンIがinteractionするPart のうち小なくともElectrostatic attraction によるPart は77から110のあいだにあると言える.このpartはカルモジュリンのカルシウムjoining part【I】【II】と【III】【IV】をつなぐαラセン-shaped part にあたる.