カルモジュリンとカルモジュリン結合蛋白質の相互作用

钙调蛋白和钙调蛋白结合蛋白之间的相互作用

• 批准号: 61215031
• 负责人: 山本 啓一
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61215031/
• 关键词: カルモジュリン; カルモジュリン結合蛋白; 一次構造上の相互作用部位

カルモジュリンはカルシウムイオンを結合すると構造変化をおこし種々の酵素と相互作用してその活性を調節する蛋白質である。その相互作用部位がカルモジュリンの一次構造上のどこにあるのかを水溶性カルボジイミドによる化学架橋によって調べた。カルモジュリンは小麦胚芽のものを用いN末端を蛍光標識しておく。カルモジュリンと相互作用する蛋白質としてミオシン軽鎖キナーゼとトロポニンIを用いた。カルモジュリンとミオシン軽鎖キナーゼ又はトロポニンIをカルシウムイオン存在下で混合し、水溶性カルボジイミドを加えて架橋した。反応させた溶液をSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動にかけるとミオシン軽鎖キナーゼやトロポニンIの少し上にカルモジュリンの蛍光を含んだ新しいバンドが見られ、それが架橋産物であることを示している。この部分を切りとり電気泳動的に溶出して架橋産物を得た。架橋産物をもう一度電気泳動にかけ純化した後臭化シアンで部分分解すると様々な長さのカルモジュリン断片が得られる。このうち蛍光を発するもの、すなわちN末端を含むものに注目する。架橋されていないカルモジュリンではN末端から37,52,73,77,110,125,146,147番目のメチオニン残基のところで切断された断片があらわれるが、架橋産物からは77までは同じ位置にあらわれるが110から上のものは全然違う位置にあらわれる。これは77から110までのあいだに架橋された蛋白が結合していて分子量が変ったせいであると考えられる。したがってカルモジュリンとミオシン軽鎖キナーゼ又はトロポニンIが相互作用する部位のうち少なくとも静電引力による部位は77から110のあいだにあると言える。この部位はカルモジュリンのカルシウム結合部位【I】【II】と【III】【IV】をつなぐαラセン状部分にあたる。

钙调蛋白是一种蛋白质，当与钙离子结合并与各种酶相互作用以调节其活性。相互作用位点位于钙调蛋白的主要结构上，通过与水溶性碳二酰亚胺进行交联，研究了。钙调蛋白由小麦胚芽制成，并在N末端标记为荧光。肌球蛋白轻链激酶和肌钙蛋白I用作与钙调蛋白相互作用的蛋白质。在钙离子存在下混合钙调蛋白和肌球蛋白轻链激酶或肌钙蛋白I，并通过添加水溶性碳二酰亚胺进行交联。当反应溶液接受SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳时，发现一个含有钙调蛋白荧光的新带略高于肌球蛋白轻链激酶和肌钙蛋白I，表明它是交联产物。切断该部分并从电泳洗脱以获得交联产品。交联产物通过电泳纯化，然后用氰化溴部分分解，以产生各种长度的钙调蛋白片段。其中，注意力集中在散发荧光的人，即含有N末端的荧光上。在非交联钙调蛋白中，片段出现在甲硫氨酸残基37、52、73、77、110、110、125、146和147位，从N末端排名第147位，但从交联产物中，最高77位出现在同一位置，而以上110位则显示在完全不同的位置。这被认为是由于以下事实：交联蛋白已经结合了77至110，并且分子量已经改变。因此，可以说，在钙调蛋白和肌球蛋白轻链激酶或肌动蛋白I I相互作用的地点中，由于静电吸引力引起的位置至少在77至110之间。该站点与连接钙蛋白钙质结合位点的类似α-SACEN的部分相对应。