大腸菌oriCおよびforC領域を含む複合体の構造と機能

含有大肠杆菌 oriC 和 forC 区域的复合物的结构和功能

• 批准号: 01560117
• 负责人: 永井 和夫
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 1990
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01560117/
• 关键词: 大腸菌; 染色体複製開始; oriC; グリコ-ゲン; グリコ-ゲン・シンタ-ゼ; 複製; 細胞複製

1、大腸菌染色体複製開始過程の温度感受性変異株PC2(dnaC2)の培養温度を変化させることにより、染色体複製に関して同調化した。複製開始直後の菌体を集め、フレンチプレス破砕,超遠心分画,塩化セシウム密度勾配遠心を経て、目的とする染色体複製開始領域(oriC領域)を含む複合体(oriC複合体)を必要量調製した。2、1で得られたoriC複合体と、ほぼ一致する分画にグリコ-ゲンが見出され、また、分子量75Kd,55Kd,35Kdの蛋白が存在する。この中55Kd蛋白については、N末10残基のアミノ酸配列から、グリコ-ゲン・シンタ-ゼ(GS)と推定された。3、2の推定の当否を検証するために、GS欠損(glgA^ー)とdnaCとの2重変異株を調製し、この株より1の方法に従ってoriC複合体を分離した。4、3で得られたoriC複合体区分にはグリコ-ゲンおよび55Kdの蛋白が認められず、また、同時に75Kd,35Kdの蛋白も検出されなかった。この結果から、55Kdの蛋白がGSであることが証明され、また、75Kd、35Kdの蛋白もグリコ-ゲン合成関連のものであることが示唆された。5、oriC複合体中に含まれる蛋白の解析を目的として、蛋白調製法を改変しSDSーポリアクリルアミド・ゲル電気泳動で検討したところ、新たに、分子量17Kdの蛋白がDNAと同じ位置に沈降することを見出した。

1. The process of chromosome replication of Rhizoctonia Magnoliae begins the process of temperature-sensitive strain PC2 (dnaC2), temperature culture, chromosome replication and assimilation. Immediately after the start of the replication process, the bacterial collection and the oriC complex will be broken, the heart will be separated, the density of the cell will be linked to the cell density, and the field of chromosome replication (oriC field) will contain the necessary amount of DNA complex (oriC complex). 2. 1. The molecular weight of the protein was 75KD, 55KD, 35Kd, and its molecular weight was 75KD, 55KD, 35Kd and 35Kd. The 55Kd protein, N-terminal 10-residue, N-terminal 10-residue, N-terminal, N, N, 3. 2 "presumption": if there are any errors, GS deficiency (glgA ^), dnaC deficiency (glgA ^), two duplicates, and one method, that is, oriC complex isolation. 4. 3. The recombinant oriC complex was used to differentiate the expression of 55Kd protein, protein, and the protein of 75KD, 35KD, and 35Kd, respectively. The results showed that the synthesis of 55Kd protein, GS protein, 75Kd, 35Kd protein, protein, protein and protein. 5. In the oriC complex, the protein containing protein was analyzed. The purpose was to modify the SDS protein, molecular weight, molecular weight, 17Kd protein, protein, molecular weight, protein, protein, protein,

项目成果

T.Kataoka: "Only oriC and its flanking region are recouered from the complex formed at the time of initiation of chromosome replication in Escherichia coli" Research in Microbiology. 142. (1991)

T.Kataoka：“只有 oriC 及其侧翼区域是从大肠杆菌染色体复制起始时形成的复合物中回收的”微生物学研究。

Eijro Watanabe et al.: "Purification and characterization of the sop B gene product which is responsible for stable maintenance of mini-F plasmid" Mol.Gen.Genet.218. 431-436 (1989)

Eijro Watanabe 等人：“负责稳定维持 mini-F 质粒的 sop B 基因产物的纯化和表征”Mol.Gen.Genet.218。

Shinyo Gayama: "Periodic formation of the oriC complex of Escherichia coli" The EMBO Journal. 9. 3761-3765 (1990)

Shinyo Gayama：“大肠杆菌 oriC 复合体的周期性形成”EMBO 杂志。