簡便な器官培養法を用いたヒト組織の細胞動態

使用简单的器官培养方法研究人体组织的细胞动力学

• 批准号: 01570177
• 负责人: 中村 真一
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Hamamatsu University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570177/
• 关键词: 細胞動態; DNA合成; S期; BrdU; オ-トラジオグラフィ-; 標識率

ディスポ-ザブルシリンジを用いた器官培養法:生検材料、手術摘出材料、術中迅速材料から、剃刀を用いて1mm以下に薄切した材料を採取し、20mlのディスポ-ザブルシリンジ(ニプロ)に、注射針(18G、ニプロ)をつけ、Brd U(200μM、Sigma社)添加RPMI 1640培地(日水製薬)を約10ml吸引する。薄切材料をシリンジ内にいれ、内筒を元に戻してシリンジ内を培養液と材料だけにする。次に注射筒の針先から酸素を入れ、注射針をはずし、手製のアルミ製ホルダ-(厚さ、1.2mm)にシリンジの先端を押し付け、内筒を押して加圧する。酸素を1/3の体積に圧縮すると3気圧が得られる。ホルダ-を37℃の恒温水漕(大洋科学、Mini-80)に漬け、1時間振盪培養する。材料は70%エタノ-ル固定する。パラフィン包埋後3μn薄切標本を作成。脱パラフィン後、4NHCLで30分間処理し2本鎖DNAを1本鎖とした後、0.1MNa_2B_4O_7で中和した。抗BrdU抗体(Becton・Dickinson)を用いた酸素抗体法でDNA合成期の細胞を検索した。標識結果の検討:生検材料、手術材料、術中迅速材料の新鮮材料は新鮮なほど良い結果が得られたが、摘出後直ちに培養液に入れ4℃に保存すれば、4〜5時間後でも十分な標識像が得られた。先天性横紋筋肉腫の皮膚転移腫瘍細胞の標識率は24%であった。表皮や皮膚付属器ではごく稀に標識細胞が認められた。手術摘出消化管の検索では、進行胃癌20例中15例、進行大腸癌8例全例、また直腸癌5例中4例で、びまん性の標識細胞の分布像が観察できた。進行癌の症例では、癌細胞が漿膜下まで浸潤し、粘膜、粘膜下、固有筋層、漿膜下と浸潤癌細胞に標識がびまん性に観察されたものがあった。標本も大きく外科材料の半分ほどでも、十分な標識が可能であった。本法は我々がすでに報告したex vivo autoradiographyに匹敵する標識方法を考えられる。

Organ culture method: raw materials, surgically extracted materials, intraoperative rapid material extraction, razor used to thin cut materials below 1mm, 20ml of raw materials, injection needle (18G, pH), Brd U(200μM, Sigma), RPMI 1640 culture medium (Japanese water preparation), about 10ml suction. Thin cut material inside the tube, inside the tube. The needle of the syringe is inserted into the syringe, the needle is inserted into the syringe, the needle is manually manufactured, and the needle is inserted into the syringe (thickness: 1.2mm). The tip of the syringe is pressed, and the inner cylinder is pressed. Acid 1/3 of the volume of pressure reduction, 3 pressure to obtain A 37℃ constant temperature water bath (Ocean Science, Mini-80) is used for incubation and 1-time shaking culture. The material is 70% fixed. 3μn thin-cut plums were prepared after embedding. After removal, 4 N HCL was used for 30 minutes to treat 2 DNA fragments and 1 DNA fragment was neutralized by 0. 1 M Na_2B_4O_7. Anti-BrdU antibodies (Becton Dickinson) were used to detect DNA synthesis in cells. Identification results: fresh materials, surgical materials, intraoperative rapid materials, fresh materials, fresh materials, good results, good results. The identification rate of cells in congenital striated sarcoma was 24%. The epidermis and the skin are attached to each other. 15 of 20 cases of gastric cancer, 8 of all cases of colorectal cancer, 4 of 5 cases of rectal cancer, and the distribution pattern of sex marker cells were observed. Cancer cases, subserous invasion of cancer cells, mucosa, submucosa, muscularis propria, subserous invasion of cancer cells are identified by sex. The surgical material is semi-finished and the mark is ten-finished. This article reports on the identification method of ex vivo autoradiography

项目成果

中村真一: "簡便な器官培養法を用いた消化管腫瘍の細胞動態" 日病会誌. 77. 220 (1988)

Shinichi Nakamura：“使用简单器官培养方法的胃肠道肿瘤的细胞动力学”日本疾病协会杂志 77. 220 (1988)。

中村真一: "簡便な器官培養法を用いたヒト組織の細胞動態" 病態生理. 9. 157-160 (1990)

Shinichi Nakamura：“使用简单器官培养方法的人体组织的细胞动力学”病理生理学 9. 157-160 (1990)。