Poli遺伝子導入トランスジェニックマウスにおけるウレタン誘発肺発がんの解析:損傷乗り越え型DNA合成酵素遺伝子Poltは肺発がん耐性遺伝子Par2と同一か?
Poli转基因小鼠乌拉坦诱发肺癌分析:损伤存活DNA合酶基因Polt与肺癌抗癌基因Par2相同吗?
基本信息
- 批准号:16021258
- 负责人:
- 金额:$ 2.43万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:2004
- 资助国家:日本
- 起止时间:2004 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
マウスPoli(DNA polymerase t)は18番染色体上に存在する肺発がん耐性遺伝子座Par2(Pulmonary adenoma resistance 2)の候補遺伝子である。Poliの過剰発現がウレタン誘発発がん感受性に及ぼす影響を調べるため、肺特異的発現プロモーターの下流にPoli cDNAを連結した外来遺伝子をマウス受精卵に注入し、Poliトランスジェニックマウスの作製を試みた。マウス肺腫瘍の殆どは肺胞2型上皮細胞より発生するものと考えられている。従って、肺胞2型上皮細胞で特異的に発現するヒトsurfactant protein C遺伝子のpromoterの下流にPromega社PCI vector由来のchimeric intron、C57BL/6マウス肺よりクローニングしたPoli cDNA、SV40 late polyA signalをこの順に連結した組換えPoli遺伝子を作製した。定法によって組換え、Poli遺伝子をBALB/cマウス受精卵にマイクロインジェクションした後、偽妊娠雌マウスの卵管へ移植し、仔マウスを出産させ、3匹の初代トランスジェニックマウスが創出された。その後、得られた初代トランスジェニックマウスをBALB/cマウスと交配し、transgeneを有する個体を継代した。各々のトランスジェニックマウス系統より2、3匹をサンプリングして屠殺し、肺組織を採取した。肺組織よりRNAを抽出した後、同RNAを使用した定量的RT-PCR行い、各トランスジェニックマウス系統におけるtransgeneの発現量を調べた。その際、endogenous Poli遺伝子由来のmRNAとtransgene由来のmRNAが区別できるよう、PCRプライマーの設定を工夫した。その結果、3系統のうちの1系統に微量の組換えPoli遺伝子mRNAの発現を検出したが、この量はendogenous Poli遺伝子発現量の10分の1以下であった。その他2系統では組換えPoli遺伝子の発現を認めなかった。微量の組換えPoli遺伝子発現を認めた系統のマウス10匹にウレタンを投与し、肺腫瘍の発生数を対照マウスと比較したが、統計学的に有意な差を検出できなかった。今年度の研究では、残念ながら組換えPoli遺伝子mRNAの十分な発現を示すトランスジェニックマウスを得ることができなかった。今後は、異なるプローモーターを採用して、さらにPoliトランスジェニックマウスの作出を試みると同時に、Poliノックアウトマウスの作出を行い、Poli発現が遺伝的肺発がん感受性に及ぼす影響を解明したい。
A candidate gene for Par2(Pulmonary adenoma resistance 2) exists on chromosome 18. Poli cDNA is linked to foreign genes and is used to control the development of Poli in vitro. The development of lung cancer is closely related to the development of type 2 epithelial cells. In addition, cell type 2 epithelial cells express specific surfactant protein C gene promoter downstream of Promega PCI vector derived Chimeric intron, C57BL/6, SV40 late polyA signal, which is linked to Poli gene promoter. The method of determining the number of embryos, Poli, and poli is used to determine the number of embryos, and the number of embryos. After the first generation, the BALB/C system was established. Each of the three groups of individuals was selected from the group consisting of two or three groups of individuals. After RNA was extracted from lung tissue, quantitative RT-PCR was performed using the same RNA, and the amount of transgene expression was modulated in each individual system. The difference between mRNA of origin and mRNA of origin of endogenous Poli gene and the time of setting up PCR The results showed that the expression of endogenous Poli gene mRNA was detected in 3 systems and 1 system, and the expression of endogenous Poli gene was detected in 10 minutes or less. 2. The system is composed of two parts. Micro-composition Poli gene detection detection system is based on the comparison of the number of samples and the statistical analysis of the number of samples This year's study shows that the expression of Poli mRNA is very important. In the future, Poli will try to make a decision on the use of different technologies, and at the same time, Poli will find out the sensitivity and influence of different technologies on lung development.
项目成果
期刊论文数量(4)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Genetic linkage between Poli deficiency and increased susceptibility to lung tumors in mice.
Poli 缺乏与小鼠肺部肿瘤易感性增加之间的遗传联系。
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- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Lee;G-H;Matsushita;H.
- 通讯作者:H.
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