トランスポゾンTn3のコ-ドするトランスポゼ-スの性質と転移の分子機構の解明

阐明转座子Tn3编码的转座酶的特性及转座的分子机制

• 批准号: 01580250
• 负责人: 大坪 栄一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01580250/
• 关键词: トランスポゾン; トランスポゼ-ス; 末端逆向き配列; DNA組換え; DNA転移機構; Tn3

バクテリアのアンピシリン耐性トランスポゾンTn3(4957塩基対)は、トランスポゼ-スをコ-ドし、自分自身の転移を促す。本研究の目的は、Tn3のトランスポゼ-スを精製し、(1)Tn3の両端にある38塩基対からなる末端逆向き配列(IR)DNAとの結合様式を明らかにすると共に、(2)Tn3転移反応に於いてトランスポゼ-スと協同して働く宿主ファクタ-を探ることである。この目的に対して以下の結果を得た。1.トランスポゼ-スとIR DNAとの結合。異なる変異を持つ種々のIR DNAを持つプラスミドを作製し、それらのDNAの断片をフィルタ-・バインディング・アッセイとDNase Iフットプリント法によってトランスポゼ-スとの結合を解析したところ、IRには二つの領域、即ちトランスポゼ-スが結合する領域と結合しない領域、が存在することを明らかにした。また、変異IRを持つTn3誘導体の転移活性を調べたところIR内の転移に必須の部位は、トランスポゼ-スが結合する、しないに関わらず全域にあることも明らかにした。更に、組換え現象にHUやIHF等の蛋白質が関与していることが示唆されていることから、Tn3の転移においてもこれらのが関与しているかどうかを、HUタンパク質を欠損している菌株において調べたところ、Tn3は転移することが分かった。2.Tn3転移に必要な宿主ファクタ-。Tn3を運ぶミニ・プラスミドをdonorとし、ラムダ・ファ-ジDNAをrecipientとして、大腸菌のcell extract(フラクションII)中に精製したトランスポゼ-スを加え、ファ-ジDNAをpackagingした後、転移生成物を調べたところ、Tn3の転移にDNA合成は必須であるが、RNA及びタンパク質合成は必須でないことを明らかにした。

I don't know what to do. I don't know. I don't know what to do. In this study, the purpose of this study is to: (1) the combination of Tn3

项目成果

H.Ichikawa: "Two domains in the terminal inverted repeat sequence of transposon Tn3." Gene. 86. 11-17 (1990)

H.Ich​​ikawa：“转座子 Tn3 末端反向重复序列中的两个结构域。”

J.Amemura: "Transposition inmunity of Tn3 is conterred by the transposase binding in the terminal inverted repeat sequenses of Tn3" Gene. (1990)

J.Amemura：“Tn3 的转座免疫受到 Tn3 基因末端反向重复序列中转座酶结合的阻碍”。

大坪栄一(松原謙一編): "岩波講座ー分子生物科学2,遺伝子と遺伝の情報II,3.動く遺伝子,原核生物" 岩波書店, 26 (1989)

大坪英一（松原宪一编）：《岩波讲座 - 分子生物学 2、基因和遗传信息 II、3. 移动基因、原核生物》 岩波书店，26（1989）