mRNA安定性による遺伝子発現の制御-転写終結領域の機能

通过 mRNA 稳定性控制基因表达 - 转录终止区的功能

• 批准号: 01580249
• 负责人: 饗場 弘二
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01580249/
• 关键词: 転写終結領域; 逆くり返し配列; mRNAの安定性; CRP; crp遺伝子

1)プラスミド上にクロ-ン化した大腸菌crp遺伝子の3′フランキング領域にある逆くり返し配列の一部を欠失した変異遺伝子を作製した。これらの欠失は、DNA配列を決定することにより確認した。2)変異crpを菌内に導入し、合成されるCRP量を、CAMP結合能の測定およびPAGEにより解析したところ、変異crpから合成されるCRP量は、野生型の約1/3に低下していることが明らかになった。3)SIアッセイにより、crpmRNA量を解析した結果、変異crpのmRNA量は、野生型に比べ1/3量に低下していた。4)SIアッセイにより、crpmRNAの安定性を解析したところ、変異型crpのmRNAの半減期は、野生型に比べ約1/2に低下していた。5)ノ-ザンブロッティングにより、crpmRNAのサイズを解析した結果、野生型では、逆くり返し配列部分で終結したRNAが大多数であるのに対し、変異型では、それより大きな転写産物が検出された。このことは逆くり返し配列が転写のタ-ミネ-タ-として機能していることおよび逆くり返し配列の欠失はタ-ミネ-タ-の機能を阻害し転写のリ-ドスル-をひきおこしていることを示している。6)上記の結果から、crpタ-ミネ-タ-は、転写終結機能とともに、mRNAの安定化により、遺伝子発現の正の制御因子としても働いていることが明らかになった。

1) in the first place, we need to know that there is a lack of information in the field of crp. Please confirm that you are in arrears, and DNA is assigned to decide that you are in arrears. 2) introduction of crp into the bacteria, synthesis of CRP, CAMP binding energy determination of PAGE, crp synthesis, CRP synthesis, wild type, low temperature, low temperature. 3) the results of SI assay, crpmRNA analysis, crp mRNA analysis and wild-type PCR were lower than those of "1cm" and "3mm". 4) the stability of SI, crpmRNA, crp, mRNA, wild type was lower than that of about 1 and 2 cycles. 5) the results of the analysis of the results, the wild type, the reverse configuration of the wild type, the reverse configuration of the RNA, and most of the samples were analyzed in the following sections: the results of the analysis of the results, the results of the analysis of the results, the results of the crpmRNA analysis, the results of the analysis of the results, the results of the analysis of the If there is a lack of information in the configuration, you will be able to prevent the loss of the queue. 6) the results of the upload, crp, and write results can be verified, the mRNA can be stabilized, and the correct control factors can be detected.