TmRNA系による標的タンパク質の精製と同定の試み

尝试使用TmRNA系统纯化和鉴定靶蛋白

• 批准号: 13878128
• 负责人: 饗場 弘二
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13878128/
• 关键词: SsrA RNA; tmRNA; trans-tranlation; ペプチドタグ; translational readthrough; サプレッサーtRNA; miscoding antibiotics; Lacリプレッサー

SsrA RNA(tmRNA)は、何らかの原因でストップコドンを欠くmRNAが生ずると、tRNAとmRNAの双方の働きをしてtrans-translationと呼ばれる反応により、新生ポリペプチド鎖に特異的なペプチドタグを付加し、ポリペプチド鎖はC末端特異的プロテアーゼの標的となり速やかに分解される。本研究は、trans-translationの生理学的意義とその分子機構を理解するための今後の研究の基礎を築くことを目的として行われ、以下の成果を得た。1)tmRNAによるトランス翻訳の内在性標的の発見プロテアーゼ耐性のタグを付加できる変異型tmRNAを構築することで、タグが付加されたポリペプチドをウエスタンブロッティングにより直接検出する系を確立した。また、この系を用いて、細胞内で実際にトランス翻訳が頻繁に起こっていること、さらに、tmRNA系の内在性標的の1つがLacリプレッサー(LacI)mRNAであることを発見した。これは、tmRNA系の内在性標的を明らかにした最初の例であり、tmRNA系の生理機能、遺伝子発現制御機能の解明へ向けての大きな一歩である。2)翻訳のリードスルーによるトランス翻訳反応の促進の発見サプレッサーtRNAがトランス翻訳を大幅に増大させること、これは、正常な終止コドンのリードスルー産物がトランス翻訳の標的となる結果であること、また、tmRNA系がサプレッサーtRNAによる翻訳上のトラブルの解消に関与していることを発見した。翻訳の誤読を誘起する一群の抗生物質が、正常な終止コドンのリードスルーを引き起こす結果、tmRNA系によるトランス翻訳を増大させること、このことが菌の抗生物質耐性に寄与していることを発見した。

SsrA RNA(tmRNA) is the most important component of SsrA RNA (tmRNA), and the most important component of SsrA RNA (tmRNA) is its ability to express mRNA, tRNA, and mRNA. This study aims at understanding the physiological significance of trans-translation and its molecular mechanism, and building the foundation for future research. 1) The development of tmRNA as an intrinsic marker of gene expression and gene expression However, when this system is used, transcription occurs frequently in cells. Today, the intrinsic target of the tmRNA system, Lac Lipri ー(LacI)mRNA, is revealed. The first example of the intrinsic target of tmRNA is the physiological function of tmRNA, the function of gene expression control, and the development of tmRNA. 2)The results showed that there was a significant increase in the activity of tRNA and tmRNA, and that there was a significant increase in the activity of tRNA and tRNA. A group of antibiotics are induced by the presence of a gene that normally terminates in a gene. The results show that tmRNA increases in the presence of a gene that inhibits the development of antibiotic resistance.

项目成果

Kimata, K., Tanaka, Y, Inada, T., Aiba, H.: "Expression of the glucose transporter gene, ptsG, is regulated at the step of mRNA degradation in response to glycolytic flux in Escherichia coli."EMBO J.. 20. 3587-3595 (2001)

Kimata, K.、Tanaka, Y、Inada, T.、Aiba, H.：“葡萄糖转运蛋白基因 ptsG 的表达在响应大肠杆菌糖酵解通量的 mRNA 降解步骤中受到调节。”EMBO J.

Ueda, K., Yamamoto, Y., Ogawa, K., Abo, T., Inokuchi, H., Aiba, H.: "Bacterial SsrA system plays a role in coping with unwanted translational readthrough caused by a suppressor tRNA"Genes to cells. (in press). (2002)

Ueda, K.、Yamamoto, Y.、Okawa, K.、Abo, T.、Inokuchi, H.、Aiba, H.：“细菌 SsrA 系统在应对由抑制 tRNA 引起的不需要的翻译通读中发挥着作用”基因