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細胞増殖に関与する新しいサイトカインLD78の分子生物学的研究

参与细胞增殖的新型细胞因子LD78的分子生物学研究

基本信息

批准号：
02152090
负责人：
島田和典
金额：
$ 3.71万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02152090/
关键词：
LD78 サイトカイン発現調節 Jurkat K562 プロモ-タ-

项目摘要

細胞増殖や炎症反応に関与していると考えられるサイトカインLD78をコ-ドする2種類の遺伝子(LD78α、β)の構造を解析後、PCR法を用いたmRNA phenoーtypingの実験によりα及びβ遺伝子ともに転写されていることを見いだした。またノ-ザンブロット解析から、HL60などのマクロファ-ジ系細胞ではPMA刺激によってLD78mRNAの発現が誘導され、シクロヘキシミド添加により発現が増強されることが分かった。一方Jurkat T細胞ではPMA刺激で発現誘導はおこらず、PHA刺激により発現誘導されるが、シクロヘキシミド添加により発現は阻害された。これらのことから、LD78遺伝子の発現制御は細胞種により異なることが分かった。この発現制御の違いを調べるためにLD78α遺伝子プロモ-タ-の5'及び3'deletionをCAT遺伝子に接続し、Jurkat及びPMA刺激で巨核球に分化するK562細胞にトランスフェクションした。その結果いくつかのpositiveに働く領域が存在することを見いだし、その内の一つはJurkatでのみ働いていることがわかった。またnegativeに働く領域が存在し、その配列は1Lー3遺伝子プロモ-タ-中に存在するnegativeに働く配列とよく似ていた。このLD78α遺伝子のnegativeに働く配列のtetramerはエンハンサ-活性を抑制した。またゲルシフト法を用いて調べるといくつかの核タンパクとのコンプレックスを形成した。これらのバンドのタイムコ-スを調べると、LD78mRNA発現量のピ-クである刺激後5時間よりしだいに増加し、シクロヘキシミド添加によりこれらのバンドが消失した。従ってこれらの核タンパクがLD78mRNA発現抑制に関与していると考えられた。

After analyzing the structure of two kinds of genes (LD78 α and β), PCR method was used to analyze the mRNA pheno typing of the gene. The expression of LD78 mRNA was induced by PMA stimulation in HL60-derived cells, and the expression of LD78 mRNA was enhanced by PMA stimulation. Jurkat T cells respond to PMA stimulation, PHA stimulation, induction and inhibition. The development of LD78 gene is controlled by cell species. The expression of these genes is regulated by LD78 α gene deletion, CAT gene deletion, Jurkat and PMA stimulation, and megakaryocyte differentiation in K562 cells is regulated by LD78 α gene deletion. As a result, the positive domain exists, and the negative domain exists. The negative field exists, and the negative field exists, and the negative field exists. The LD78 α gene is negative, and the tetramer is negative. The method of selecting and selecting a candidate for the post is described in detail below. The expression of LD78 mRNA increased 5 minutes after stimulation, and the expression of LD78 mRNA disappeared 5 minutes after stimulation. The expression of LD78 mRNA was inhibited by the expression of LD78 mRNA.