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ブタ下垂体生殖腺刺激ホルモン遺伝子の発現調節領域と結合因子の解析

猪垂体促性腺激素基因表达调控区及结合因子分析

基本信息

批准号：
02640578
负责人：
加藤幸雄
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ブタゴナドトロピン遺伝子(α鎖,FSHβ鎖およびLHβ鎖)のクロ-ニングを行い,全エクソンを含む塩基配列を決定した.各遺伝子のコ-ディング領域はウシやヒトで知られているものと同じ位置で介在配列(イントロン)により分断されていた。また、発現を調節すると思われる遺伝子上の配列を検索すると、5'上流には、cAMPーresponsive element(CRE)に類似の配列がそれぞれ1箇所づつ見いだされた。そのほか、プロテインキナ-ゼCあるいはAを介する情報伝達系の応答配列であるAP1ーおよびAP2ーresponsive element(AP1、AP2)、転写を促進する配列GCーboxやCACCCーboxなどが存在した。この事実は、ゴナドトロピンのサブユニット遺伝子の発現が、必ずしも同調していないというこれまでの結果を支持する。また、遺伝子断片に対する結合因子の解析実験では、下垂体前葉組織の核タンパク質画分に、CRE、AP1、AP2の各配列に結合する因子が核抽出物中に存在しすることが判明した。これらの結合は、他の塩基配列による結合阻害が認められず特異的な核内因子との結合と判断した。また、ブタゴナドトロピン遺伝子の5'上流断片を用いた、競合実験では、いずれの場合でも結合の阻害が認められ、遺伝子断片上に核内因子が結合しうることが判明した。これまでの実験で核内因子との結合が確認できたα鎖遺伝子の一部の配列を化学合成し、動物細胞発現ベクタ-であるpTKGHに組み込み、ブタ前葉細胞の初代培養細胞への遺伝子導入を行った。プロテインキナ-ゼCを活性化するGnRHおよびTPA、あるいはcAMPのレベルを上げるforskolinを用いて、導入された合成配列が遺伝子の転写レベルにどの程度影響するかを調べた。その結果、確かに組み込んだα鎖遺伝子上のCREとAP1は、2箇所ともプロテインキナ-ゼCとcAMPの情報伝達系の変動に応じて、転写レベルを上昇させることが判明した。以上のごとく、ホルモン遺伝子の発現調節に係わる因子の解析が進んだ。

A complete set of base pairs is determined by the selection of base pairs of alpha,FSH beta and LH beta pairs. Each of the three sub-fields is divided into two parts: the first part is divided into two parts: the second part is divided into two parts: the third part is divided into three parts: the fourth part is divided into three parts: the fourth part is divided into four parts: the fourth part A 5'upstream cAMP responsive element(CRE) is similarly arranged in a single position. The information system is configured with AP1 and AP2 responsive elements (AP1 and AP2), and the configuration GC box and CACCC box are enabled. The results of this research are supported by the discovery of a coherent vector. The analysis of binding factors in the nuclear extracts of the anterior lobe tissue of the pituitary gland was carried out to determine the presence of binding factors in the nuclear extracts of CRE, AP1 and AP2. The binding resistance of these binding factors is recognized by the binding resistance of specific nuclear factors. The 5'upstream fragment of the DNA fragment is used in the middle, in the middle and in the middle, in the middle and in the middle, in the middle, in the middle The binding of nuclear factors was confirmed by chemical synthesis of a part of the alpha gene, the development of animal cells and the introduction of genes into primary cultured cells of the leaf cells. The level of GnRH and TPA activation, cAMP activation, forskolin activation, introduction of synthetic alignment, and gene activation are regulated. The results show that CRE and AP on the α-lock vector increase with the increase of CRE and AP on the α-lock vector and the increase of CRE and AP on the α-lock vector. The analysis of the factors regulating the development of the above genes is further developed.