PDMホスファタ-ゼによる加水分解反応の立体化学

PDM磷酸酶水解反应的立体化学

• 批准号: 02640417
• 负责人: 吉田 浩
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Shimane Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02640417/
• 关键词: ホスファタ-ゼ; 加水分解反応; 立体化学

植物病原菌Fusarium moniliformeから単離された特異なリン酸エステル加水分解酵素,PDMホスファタ-ゼの加水分解時の立体化学を解明する目的で,次の研究を行った。1.フェニルチオホスホン酸pーニトロフェニル(1__〜)を既知の方法で合成した。2.(1__〜)はP原子まわりのキラル化合物で,Rp体とSp体のラセミ混合物である。これに蛇毒ホスホジエステラ-ゼを作用させ,<1S>___〜を立体特異的に加水分解,<1R>___〜を残した。3.上の反応経過は遊離pーニトロフェノ-ル(2__〜)を定量する比色分析で追える。しかし,より直接の分析を目指し,高速液体クロマトグラフィ-(HPLC)による分析法を確立した。ODSーシリカカラムを用い,1%トリフルオロ酢酸水溶液:アセトニトリル=40:60を溶媒にするイソクラティック溶出で,生成物の2__〜とフェニルチオホスホン酸(3__〜)および基質(1__〜)の三者をきれいに分離できた。4.上で確立したHPLCを用い,1__〜の蛇毒ホスホジエステラ-ゼ消化物から<1R>___〜を単離した。5.1__〜がPDMホスファタ-ゼで分解されることは比色分析で明らかにされている。しかし,反応が極めて遅く,1__〜の非酵素的脱硫反応が先行,生じたO含有類似体フェニルホスホン酸pーニトロフェニルが酵素的に加水分解され2__〜を生じるのではとの疑念があった。しかし,今回開発したHPLC分析法で,1__〜が直接酵素作用を受け,2__〜と3__〜を生じることを証明できた。当該年度内に目的の研究は,研究代表者の転任に伴う研究の遅れのため,ここまでしか進行しなかった。しかし,純粋の<1R>___〜は得られたので,これを基質に当初の計画に従い反応の立体化学を調べる予定である。

Phytopathogen Fusarium moniliforme から単されたspecific なリン acid エステル hydrolytic enzyme, PD The purpose of the explanation of the stereochemistry of Mホスファタ-ゼの when it is decomposed with water is the purpose of the study and the conduct of the research. 1. Fructus phenyl acid (1__~) is synthesized by a known method. 2. (1__~)はP atoms are the same as the のキラル compound, and Rp body and Sp body are the のラセミ mixture.これにSnake venom ホスホジエステラ-ゼをeffectさせ,<1S>___~をStereospecific にAdd hydrolysis,<1R>___~を residualした. 3. The above-mentioned reaction was carried out and the free p-ーニトロフェノ-ル(2__~) was quantitatively analyzed and colorimetrically analyzed. The high-speed liquid HPLC analysis method has been established. ODS ーシリカカラムを use, 1% トリフフルオロ acid aqueous solution :アセトニトリル=40:60をsolventにするイソクラティックDissolution of the product, の2__～とフェニルチオホスホンacid (3__～) and および matrix (1__～) の三者をきれいにSeparationできた. 4. The above-mentioned HPLC method has been established, and 1__~の snake venom is the best solution for digestion. 5.1__～がPDMホスファタ-ゼでDecompositionされることはColorimetric Analysisで明らかにされている.しかし, 濜が极めて遅く, 1__~の non-enzyme desulfurization reaction が first, raw じたO contains analogues フェニルホThe スホン acid pーニトロフェニルが enzyme is added with water to decompose され2__~を生じるのではとのsuspicious があった.しかし, this time the HPLC analysis method of 発したで, 1__~がdirect enzyme action is をaccepted, 2__~と3__~を生じることをproven できた. When the research of the purpose is carried out within the year, the research representative will conduct the research at the same time as the research representative.しかし, Pure 粋の<1R>___~は得られたので, これをstroma に Originally planned に従いReflection のStereochemistry を Adjustment べる Predetermined である.

项目成果

H.Yoshida: "Stereochemical Course of PDM Phosphatase Hydrolysis" Bull.Chem.Soc.Jpn.

H.Yoshida：“PDM 磷酸酶水解的立体化学过程”Bull.Chem.Soc.Jpn。