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リウマチ因子産生機構におけるIgG糖鎖の生理的意義の糖鎖リモデリングによる解析

利用聚糖重构分析 IgG 糖链在类风湿因子产生机制中的生理意义

基本信息

批准号：
02680142
负责人：
水落次男
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

まず昨年度の研究成果に基づいて、リウマチ因子(抗IgG抗体)を産生するMRL/lprマウスと健常マウス(MRL/n)の血清よりプロテインAーセファロ-ズCLー4BカラムおよびセファクリルSー300カラムを用いてIgGを単離精製した。リウマチ因子産生マウス(MRL/lpr)からは、ガラクト-スを欠くという糖鎖異常を起こしたIgGと健常マウスと同様の糖鎖パタ-ンを示すIgGの二種のIgGを単離精製し、健常マウス(MRL/n)からは一種のIgGを精製した。つぎに、健常マウス由来のIgG標品を種々のシアリダ-ゼおよび種々のβーガラクトシダ-ゼで処理した後、プロテインAーセファロ-スカラムを用いて種々の酵素処理IgGを再度単離精製した。そして、それらIgGをSDSーPAGEにかけるとともに、ヒドラジン分解にかけて糖鎖を遊離して糖鎖構造解析を行い、IgG分子から蛋白質部分を壊さずにシアル酸とガラクト-スを完全に除去する方法を検討した。その結果、IgG分子をArthrobacter ureafaciensのシアリダ-ゼで処理した後に、Streptococcus6646Kのβーガラクトシダ-ゼで処理することで、シアル酸およびガラクト-スを完全欠損するが蛋白質部分は壊されていない糖鎖リモデリングIgGを作製できることを明かにできた。そこでこの糖鎖リモデリングIgGと未処理IgG、並びにMRL/lprマウスより得た二種のIgGについて抗原性の検討を行うとともにそれらの生理活性の違いを調べた。その結果、予備的ではあるが、MRL/lprマウス由来の糖鎖異常IgGは健常マウス(MRL/n)にIgM型のリウマチ因子を産生させること、調べた15クロ-ンのモノクロ-ナルリウマチ因子のうち1クロ-ンが糖鎖リモデリングIgGと未処理IgGを識別すること、マクロファ-ジFcレセプタ-に対して糖鎖リモデリングIgGが未処理IgGよりも強い親和性を示すことを見いだした。以上の知見は、IgGの糖鎖異常がリウマチ因子の産生や疾患の発症に関与していることを意味している。

まずLast year's research results of にづいて, リウマチfactor (anti-IgG antibody) をGeneration するMRL/lprマウスと凯 often Malus(MRL/n)のSerumよりプロテインAーセファロ-ズCLー4BカラムおよびSURAL 300 カラムを is purified with いてIgG single separation. The リウマチ factor produces マウス(MRL/lpr) からは, ガラクト-スをowed くというsugar lock abnormality をrise こしたIgG と凯 often マウスとSame as 様のsusususuパタ-ンを Showing すIgGの二 kinds of のIgG をsingle purified し, Kenjang マウス (MRL/n) からは一 kinds of のIgG を purified した.つぎに、Kentamasa のIgG standard product をkind 々のシアリダ-ゼおよびkind 々のβーガラクトシダ-ゼで区After the analysis, the IgG was treated with the いてkind of 々のenzyme and then isolated and purified. The sugar lock structure of the sugar lock structure Analyze the protein part of the IgG molecule and remove it completely.そのRESULT,IgGmoleculeをArthrobacter ureafaciensのシアリダ-ゼでprocessingした后に、Streptococcus6646Kのβーガラクトシダ-ゼでprocessingすることで, シアル acid およびガラクト-スを completely lacks the するがprotein part は壊されていないsugar lock リモデリングIgGをproduced できることを明かにできた.そこでこのsugar lock リモデリングIgGとUnprocessed IgG, and びにMRL/lprマウスより gotた二のIgGについてantigenicityの検questionを行うとともにそれらのphysiological activityのviolationいを Adjustmentべた. The result of その, the prepared ではあるが, the origin of MRL/lprマウスのsugar lock abnormality IgG はken often マウス(MRL/ n) IgM type のリウマチfactor させること, tune べた15 クロ-ンのモノクロ-ナルリウマチ factorのうち1クロ-ンがsugar lock リモデリングIgGとUnprocessed IgGをidentificationすること、マクロファ-ジFcレセプタ-に対してsugar lock リモデリングIgGがUnprocessed IgGよりもStrong affinity をshow すことを见いだした. The above-mentioned knowledge is related to the occurrence and development of abnormal sugar locking factor of IgG and the disease caused by the disease, and is related to the meaning of the disease.