蛋白質の溶液構造決定法の開発とペプチド性成長因子(IGFー1)への応用

蛋白质溶液结构测定方法的开发及其在肽生长因子(IGF-1)中的应用

基本信息

  • 批准号:
    02680220
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.09万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
  • 财政年份:
    1990
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1990 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

我々は、70残基のアミノ酸よりなるヒトのインスリン様成長因子IGFーI(ソマトメジンC)の溶液中での構造解析をNMRとディスタンスジオメトリ-法を併用することにより行ってきた。 ^1HーNMRを用いた解析を行っていく過程でこの分子は“やわらかい"構造をとり、ヘリックス構造の存在は示唆されるがβーシ-ト構造などは見られないことが分った。そこで、本研究所では ^1HーNMRのみでなく、 ^<13>Cや ^<15>N核といったNMRに活性である安定同位元素を用いてIGFーIをラベルし、種々の異核相関二次元NMR法を用いて、 ^1HーNMRを三次元に展開しようと試みた。共同研究者である丹羽らはすでに大腸菌を用いる融合蛋白質法によるIGFーIの大量産出系を確立していたので、栄養源として ^<15>NH_4Clと ^<13>Cエンリッチグルコ-スを用いて、蛋白質の同位体ラベルを得ようとした。しかしこのような無機塩類のみを用いた培養系では、いままで用いてきた保護ペプチド遺伝子を継いだ大腸菌中でのIGFーI遺伝子の発現は極端に低下し、また可溶画分が容易には得られなかった。NMRを用いた構造解析には蛋白質が単量体として単分散と存在することが前提であるため、得られた大溶画分を可溶化する条件を探した。その目的のため、分子量分布の測定が必要となり超遠心分析法の改善につとめ、装置をコンピュ-タとオンライン化した。解析プログラムやその他周辺機器の整備を行い、世界で初めて広い依存域(5mg/mlー30mg/ml)での分子量解析のシステムを確立できた。このシステムは、今後多くの方面で、用が期待される。IGFーIの構造確定に関しては同位体ラベルを待つ間に ^1HーNMRでの解析をさらに進め、種々のパルス系列を援用することにより、世界にさきがけて ^1HーNMRのみでその三次元構造を提出した。同位体ラベルについては今後も研究を続け、IGFーIがリセプタ-との相互作用をする状態での構造解析し利用しようと目論んでいる。
I 々 は, 70 residues の ア ミ ノ acid よ り な る ヒ ト の イ ン ス リ ン IGF ー others in growth factor I (ソ マ ト メ ジ ン C) の solution で の structure を NMR と デ ィ ス タ ン ス ジ オ メ ト を リ - method using す る こ と に よ り line っ て き た. ー ^ 1 h NMR を with い た parsing line を っ て い く process で こ の molecular は "や わ ら か い" tectonic を と り, ヘ リ ッ ク ス structure exist の は in stopping さ れ る が beta ー シ - ト tectonic な ど は see ら れ な い こ と が points っ た. そ こ で, this research institute で は ー ^ 1 h NMR の み で な く, ^ < 13 > C や ^ < 15 > N nuclear と い っ た NMR に active で あ を る stable isotopic elements with い て IGF ー I を ラ ベ ル し, kind of 々 の heteronuclear phase masato を two dimensional NMR method with い ー て, ^ 1 h NMR を three-d に expand し よ う と try み た. Study co-author で あ る niwa ら は す で に coliform を with い る fusion protein method に よ る IGF ー I の を established extensive production department し て い た の で, tech students.their ownship source と し て ^ < 15 > NH_4Cl と ^ < 13 > C エ ン リ ッ チ グ ル コ - ス を with い て, protein の with a body ラ ベ ル を have よ う と し た. し か し こ の よ う な inorganic salt class の み を with い た training department で は, い ま ま で with い て き た protection ペ プ チ ド posthumous son 伝 を 継 い だ coliform in で の IGF ー I chose 伝 son の 発 は extreme low に し, ま た draw points が easily soluble に は have ら れ な か っ た. NMR を with い た structure に は protein が 単 quantity body と し て 単 scatter と す る こ と が premise で あ る た め, ら れ た points of the great soluble を solubilization す る conditions を agent し た. そ の purpose の た め, determination of molecular weight distribution の が necessary と な り buzzer-beaters heart analysis の improve に つ と め, device を コ ン ピ ュ - タ と オ ン ラ イ ン change し た. Parsing プ ロ グ ラ ム や そ の he week 辺 machine line gearing up の を い, the early で め て hiroo い dependent domain (5 mg/ml ー 30 mg/ml) で の molecular weight parsing の シ ス テ ム を establish で き た. Youdaoplaceholder2 システム, in the future, more く く aspects で, and expect される with が. IGF ー I の structure determine に masato し て は with a body ラ ベ ル を stay between つ に ー ^ 1 h NMR で の parsing を さ ら に into め, plant 々 の パ ル ス series を invoking す る こ と に よ り, world に さ き が け て ー ^ 1 h NMR の み で そ の three dimensional structure を し た. With a body ラ ベ ル に つ い て は も future research を 続 け, IGF ー I が リ セ プ タ - と の interaction を す る state で の structure し using し よ う と MuLun ん で い る.

项目成果

期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
M.Katahira,et al.: "Structure in Solution of the RNAーDNA Hybrid (rA)_8^・(dT)_8 Determined by NMR and Raman Spectroscopy" J.Am.Chem.Soc. 112. 4508-4512 (1990)
M. Katahira 等人:“通过 NMR 和拉曼光谱测定的 RNA-DNA 杂交体 (rA)_8^·(dT)_8 溶液中的结构”J.Am.Chem.Soc. 112. 4508-4512 (1990) )
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    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
S.Koyama,et al.: "The Difference in Conformations between αーhuman Atrial Natriuretic Polypeptide,αーhANP,and its derivative,Met(O)ーαーhANP,in solution." Protein Engineering. 3. 393-402 (1990)
S. Koyama 等人:“α-人心房钠尿肽、α-hANP 及其衍生物 Met(O)-α-hANP 在溶液中的构象差异。” 3. 393-402 (1990)
  • DOI:
  • 发表时间:
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    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Y.Kobayashi,et al.: "Solution Structure of Human InsulinーLike Growth FactorーI(IGFーI)" PePtides(1990).
Y. Kobayashi 等人:“人胰岛素样生长因子-I (IGF-I) 的溶液结构”肽 (1990)。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
M.Yoshida,et al.: "ThreeーDimensional Structure of an αーAmylase Inhibitor HAIM as Determined by Nuclear Magnetic Resonance Methods." J.Biochem.108. 158-165 (1990)
M. Yoshida 等人:“通过核磁共振方法测定的 α-淀粉酶抑制剂 HAIM 的三维结构”。J.Biochem.158-165 (1990)。
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  • 发表时间:
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    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
L.Moroder,et al.: "Synthetic Immunogens.PartIV.Conformational Studies on gastrin Conjugates with the Human IgG1 Hinge Peptide 225ー232/225'ー232'" Biopolymers.
L. Moroder 等人:“合成免疫原。第 IV 部分。胃泌素与人 IgG1 铰链肽 225-232/225-232 缀合物的构象研究”生物聚合物。
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  • 发表时间:
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  • DOI:
  • 发表时间:
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  • 期刊:
  • 影响因子:
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  • 作者:
    島本 茂;中川 悠介;日高 雄二;丸野 孝浩;小林 祐次;河原 一樹;吉田 卓也;大久保 忠恭;有竹 浩介;裏出 良博
  • 通讯作者:
    裏出 良博
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  • 发表时间:
    2013
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  • 作者:
    高田 知樹;榎 学;松井 彰則;小林 祐次
  • 通讯作者:
    小林 祐次
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2016
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  • 作者:
    高田 知樹;榎 学;松井 彰則;小林 祐次
  • 通讯作者:
    小林 祐次
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2013
  • 期刊:
  • 影响因子:
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  • 作者:
    高田 知樹;榎 学;松井 彰則;小林 祐次
  • 通讯作者:
    小林 祐次
レーザーピーニング時の水中伝播AEの伝達特性の解析
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2014
  • 期刊:
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  • 作者:
    高田 知樹;榎 学;松井 彰則;小林 祐次
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抗てんかん薬が小児の身長発育,成長ホルモン及びソマトメジンc分泌に与える影響
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    $ 1.09万
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  • 财政年份:
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マウス株化骨芽細胞における合成ソマトメジンCと活性型ビタミンD_3の相互作用
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  • 批准号:
    62740444
  • 财政年份:
    1987
  • 资助金额:
    $ 1.09万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
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