蛋白質生合成の最終過程を司るリボソーム再生因子(RRF)の立体構造解析

控制蛋白质生物合成最终过程的核糖体再生因子（RRF）的三维结构分析

• 批准号: 10174219
• 负责人: 小林 祐次
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10174219/
• 关键词: RRF; リボソーム; 蛋白質生合成; 翻訳終結; NMR

従来の蛋白質生合成系の研究においては、翻訳の開始-伸長-終結の各段階に比べて、翻訳終結後のリボソーム-mRNA複合体の運命についてはあまり注目されてこなかったが、近年この複合体を解離・再生するのに不可欠な蛋白質因子であるRRFの存在が解明され、関心をもたれている。このリボソーム再生過程は、蛋白質生合成系の効率表維持するのに必須であるが、現在のところRRFの活性発現メカニズムについては不明な点が多い。そこで我々はRRFのリポソーム-mRNA榎合体認識機構などを明らかにするため、構造生物学的な研究を行ってきた。得られた成果として、1、 大腸菌、緑膿菌、高度好熱菌など各種の原核生物由来のRRFについて大量発現系を構築した。その系を用い13C、15Nといった安定同位体で標識したNMR測定用試料を得た。またより精度の高い情報を得るため、2Hによる標識や、アミノ酸側鎖特異的な標識を行った試料を調製した。2、 各種のRRFについて多核多次元NMR法を適用した結果、それぞれ大部分の核のケミカルシフトを帰属することができた。またNOE等の構造情報を収集し二次構造に関する知見を得た。3、 構造活性相関について知見を得るため、各種の変異体を作成した。4、 表面プラズモン共鳴センサー、分析用超遠心機などを用いて、RRFと他の蛋白質因子やRNAとの相互作用について検討した。

In recent years, the study of protein biosynthesis system has focused on the analysis of protein factors such as RRF, protein expression factors, protein expression factors and protein expression factors. The regeneration process of protein biosynthesis system is necessary for maintaining the efficiency of protein biosynthesis system, and the activity of RRF is unknown. We have been conducting research on RRF and mRNA synthesis to understand the mechanism of structural biology. 1. Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, highly pathogenic bacteria, and a large number of RRF derived from various prokaryotes were constructed. The system was identified by 13C and 15N stable isotopes and the samples were obtained for NMR determination. High precision information is obtained, 2H identification is obtained, and acid side lock identification is obtained. 2. All kinds of RRF methods are suitable for multi-nuclear NMR. NOE and other structural information collection and secondary structure related knowledge 3. Structural activity related to knowledge and knowledge, and various kinds of foreign materials. 4. Surface resonance, ultra-remote analysis, RRF and other protein factors and RNA interactions

项目成果

Kai,T.: "NMR Observation of Ttwo States of Triple Helix in the Thermal transition of(Pro-Pro-Gly)10." Chem.Phys.Lett.281. 86-91 (1997)

Kai,T.：“(Pro-Pro-Gly)10 热转变中三螺旋的两种状态的核磁共振观察”。

Uchiyama,S.: "Measurement of Thermodynamic Quantities in the Heating-Rate Dependent Thermal Transitions of Sequenced Polytripeptides." Chem.Phys.Lett.281. 92-96 (1997)

Uchiyama,S.：“测序聚三肽加热速率依赖性热转变中热力学量的测量”。

Hasegawa, J.: "Solution Structure of Thermostable Cytochrome c-552 from Hydrogenobacter thermophilus Determined by ^1H-NMR Spectroscopy." Biochemistry. 37. 9641-9649 (1998)

Hasekawa, J.：“通过 ^1H-NMR 光谱测定嗜热氢杆菌的耐热细胞色素 c-552 的溶液结构。”

Tamaoki, H.: "Folding Motifs Induced and Stabilized by Distinct Cystine Frameworks." Protein Engineering. 11. 649-659 (1998)

Tamaoki, H.：“由不同的胱氨酸框架诱导和稳定的折叠基序。”

Ogawa,K,: "Conformation analysis of eel Calcitonin Comparison with the Conformation of Elcatonin," Eur.J.Biochem. 257. 331-336 (1998)

Okawa,K，：“鳗鱼降钙素的构象分析与降钙素构象的比较”，Eur.J.Biochem。