Molekularbiologische, biochemische und biophysikalische Charakterisierung der Reversen Transkriptase von Rous Sarcoma-Virus

劳斯肉瘤病毒逆转录酶的分子生物学、生化和生物物理表征

• 批准号: 5244572
• 负责人: Professorin Dr. Birgitta Maria Wöhrl
• 金额: --
• 依托单位: Arbeitsgruppe Biochemie IV
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1994-12-31 至 2003-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5244572?language=en
• 关键词: Molekularbiologische; biochemische; und; biophysikalische; Charakterisierung

Verschiedene Varianten der Reverse Transkriptase (RT) von Rous Sarcoma Virus (a, b, Pol, ab und aPol) wurden biochemisch charakterisiert und ihre polymerisations-RNase H- und Integraseaktivitäten bestimmt. Mit diesen Enzymen werden nun spezifische Schritte bei der Reversen Transkription untersucht, um Informationen über den Ablauf dieser Reaktionen sowie über die Beteiligung der verschiedenen RT-Varianten (a, b, ab und aPol) an diesen Reaktionen zu erhalten. Weiterhin werden auch mutierte Enzyme zur Aufklärung dieser Schritte verwendet. Es ist geplant, die Strangtransfer-Reaktionen der (-) strong-stop und der (+) strong-stop DNA zu untersuchen. Polymerase- und RNase H- Mutanten werden eingesetzt, um festzustellen, ob die Polymerase- bzw. RNase H-Aktivität für diese Reaktionen wichtig sind. Weiterhin wird untersucht, welche Enzyme die Primer-Selektion für den Start der (+) Strangsynthese korrekt durchführen können. Die Beteiligung des viralen Nukleokapsidproteins an diesen Reaktionen soll ebenfalls analysiert werden. Vorläufige Ergebnisse mit der Integrasedomäne der RT deuten auf eine katalytisch aktive Integrase im ab Heterodimer sowie in den beiden Homodimeren b und Pol hin. Weitere Experimente sind geplant, um die Befunde zur Integrationsreaktion zu erhärten sowie die Bedeutung der Integrasedomäne und -funktion bei der Reversen Transkription herauszufinden.

劳斯肉瘤病毒逆转录酶（RT）的Versedene变异体（a，B，Pol，ab和aPol）具有生物化学特性和聚合-RNase H-和整合活性。Mit diesen酶韦尔登nun speciziophores他Schritte bei der Reversen Transkription untersucht，um Informationen über den Ablauf dieser Reaktionen sowie über die Beteiligung der versedenen RT-Varianten（a，B，ab und aPol）an diesen Reaktionen zu erhalten. Weiterhin韦尔登也有多种酶，可用于消化。这是一种利用（-）强终止DNA和（+）强终止DNA进行DNA链转移反应的方法。聚合酶和核糖核酸酶H突变体可以通过聚合酶的作用而被识别. RNase H-Aktivität für diese Reaktionen wichtig sind. Weiterhin wird untersucht，welche Enzyme die Primer-Selektion für den Start der（+）Strangsynthese korrekt durchführen können.病毒核衣壳蛋白质的分离及其反应可用于韦尔登。通过RT介导的整合作用，在同源二聚体B和Pol中发现异源二聚体的催化活性整合酶。Weitere Experimente sind geplant，um die Befunde zur Integrationsreaktion zu erhärten sowie die Bedeutung der Integrasedomäne und -function bei der Reversen transskription herauszuden.