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魚類ウイルス病の簡易診断法の開発

鱼类病毒病简单诊断方法的开发

基本信息

批准号：
03660186
负责人：
福田穎穂
金额：
$ 0.77万
依托单位：
東京水産大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、操作が極めて単純な、魚類ウイルス病診断法の開発を目的とし、抗原抗体反応に基礎をおくサンドイッチ法を用い、サケ科魚類の病原ウイルス、IHNVとIPNVをモデルとして、反応条件、担体の種類等を検討し、以下の成果を得た。1.サンドイッチ法の担体として、3種のメンブランフィルタ-の有用性を比較し、ニトロセルロ-ス膜を選択した。一方、細胞のアセトンパウダ-によって使用抗血清の呼吸を行うこと、ならびに、細胞培養液をビオチン標識特異抗体の希釈用溶液として用いることによって、非特異的な反応を著しく抑制することができた。また、上記2種ウイルス以外の魚類病原ウイルス、4種を供試し交差性を検討したが、交差反応は見られず、使用した抗体の特異性が確認された。さらに特異抗体を吸着させた後にブロッキングを行ったため、ドットブロット法に較べ、反応時間2時間短縮することができた。最後に、1担体に2種の上記ウイルスに対する特異抗体を位置をかえてそれぞれ吸着させること、及び両ウイルスに対するビオチン標識特異抗体を混和して反応させることにより、一つの担体上において複数のウイルスの検出が可能であることを確認した。2.特異抗体を吸着させた担体を室温乾燥、凍緒乾燥ならびに湿潤状態で保存し、経時的に反応性を調べた結果、最低5カ月間の保存には耐え得ることを明らかにした。3.実験感染魚からのウイルスの検出に本法を応用し、両ウイルスの検出・同定が可能であることを確認した。上記研究結果から本診断法が、魚類ウイルス病の簡便かつ迅速な診断法として有用であり、また、特殊な器具を必要とせず、養殖現場での実施にも極めて適した方法であることが確認できた。

This study aims to develop diagnostic methods for fish diseases, to explore the use of antigen antibody reaction as a basis for diagnosis, to investigate the pathogenic factors of fish, IHNV IPNV reaction conditions, and carrier types, and to obtain the following results. 1. Comparison of the usefulness of three kinds of support materials and the selection of film materials A solution for the identification of specific antibodies in cell culture medium is used to inhibit respiration by using antiserum. 2 species of fish pathogens were identified, 4 species were tested, and the specificity of antibodies was confirmed. The time required for the specific antibody to be adsorbed is shortened. Finally, it is confirmed that the detection of multiple specific antibodies on one carrier is possible by mixing specific antibodies on two carriers. 2. Specific antibodies are adsorbed on the support and stored at room temperature, frozen dry or wet conditions. The results are adjusted when stored for at least 5 months. 3. To detect the presence of infected fish, this method is used, identified and confirmed. The results of this study are as follows: simple and rapid diagnosis of fish diseases, useful diagnosis, necessary diagnosis of special equipment, and appropriate diagnosis of fish breeding sites.