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緑膿菌の産生するエラスタ-ゼ、アルカル性プロテア-ゼの分子遣伝学的検討

铜绿假单胞菌产生的弹性蛋白酶和碱性蛋白酶的分子遗传学研究

基本信息

批准号：
03670219
负责人：
奥田研爾
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

今まで緑膿菌エラスタ-ゼ(以下PE)の遣伝子を釣り上げ、一次構造を決定したが、今回はPEの高次構造をX線解析及びcomputergraphicを使用して研究を行った。X線解析は、阪大蛋白研勝部教授と行っていたが、gallowayらが(Biochemistry1991年)報告したので、我々は途中で中止し、このCompitergraphicの研究を行い、サ-モリシンと極めて類似していることが判明し、現在投稿中である。PE非産生の緑膿菌であるIFO3080株、PA103株、N‐10株について、まずその変異株のPE構造遣伝子のクロ-ニングを行なった。これら3つの野生株よりPEの遣伝子を釣り上げ、pEL3080R、pEL103R、pEL10と名付けた。これらプラスミドで形質転換したE、coli菌株についてエラスチン活性を測定したところ、E、Coli pEL103RとE、coli pEL10に活性があり、E、Coli pEL3080Rには活性が無かった。更にこの3つの変異株のエラスタ-ゼ構造遣伝子の塩基配列を決定し、PE産生株であるIFO3455株のエラスタ-ゼ構造遣伝子と比較してみた。N‐10株とPA103株については、わずかな塩基配列の違いを除いて、ほぼ同じであり、この2つの構造遣伝子は正常であると考えられ、緑膿菌体内でのPEの産生はこの遣伝子の発現が抑制されていることが考えられた。IFO3080株のエラスタ-ゼ構造遣伝子の塩基配列はIFO3455株と比べたPE構造遣伝子中に1塩基(627番)の欠損があるため、その以降のアミノ酸配列がフレ-ムシフトにより変異していた。しかし、今のところP.aeruginasa IFO3080株のエラスチン分解活性及びウエスタンブロッティングにおいて上述のような結果となったことは明らかではなかった(J、Bacteriol.1991)。現在、アルカリ性プロテア-ゼの非産生株より遣伝子を釣り上げ、その遣院子構造を解析している。

This paper studies the application of X-ray analysis and computer graphics in the determination of primary structure of Pseudomonas aeruginosa. X-ray analysis: Professor of the Department of Protein Research, Osaka University (Biochemistry1991). PE non-producing Pseudomonas aeruginosa strains IFO3080, PA103, N 10, and PE structural variants of different strains. PEL3080R, PEL103R, PEL10 E. coli pEL103R E. coli pEL10 pEL103R E. coli pEL3080R pEL3080R pEL103R E. coli pEL10 pEL103R E. coli pEL3080R pEL103R E. coli pEL103R E. coli pEL103R pEL In addition, three different strains of IFO3455 were selected for the determination of the nucleotide alignment of the structural genes. N10 PA103 IFO3080 strain is different from IFO3455 strain in the structure of the first base (627 points). P. aerogenasa IFO 3080 strain has been identified as a sensitive strain to the molecular activity and molecular weight of the enzyme (J, Bacteriol.1991). Now, we can analyze the structure of the plant.