線膿菌エラスタ-ゼ、及びアルカリ性プロテア-ゼの分子遺伝学的検討

假单胞菌弹性蛋白酶和碱性蛋白酶的分子遗传学研究

• 批准号: 01570242
• 负责人: 奥田 研爾
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570242/
• 关键词: 緑膿菌; エラスタ-ゼ; アルカリ性プテア-ゼ; 構造遺伝子; アミノ酸配列; 前駆体蛋白

近年、従来弱毒菌と目されてきた線膿菌、大腸菌、セラチア等の、日和見感染を起こす病原因の臨床上の重要性が増している。今回の研究はそれら微生物の産生する種々の因子のうち、主に感染性を規定している蛋白分子を、分子遺伝学的な面から解明した。具体的には、病原性のある緑膿菌(Ps aeruginosa IFO 3455)の産生するエラスタ-ゼ及びアルカリ性プロテア-ゼの遺伝子を抽出し、次にそのDNAの塩基配列まで決定し、次には活性部位の他酵素との相同性を見出し、酵素の性質を詳細に検討することを目的として行った。これら取り出した遺伝子を、プロテア-ゼ、エラスタ-ゼ非産生緑膿菌に導入し、そのvirulencyに及ぼす影響も考える。我々がクロ-ン化して、そのDNA配列を決定した結果は、アミノ酸配列より、mature蛋白コ-ド領域が903bp、アミノ酸301残基、分子量は32.926であった。又、23個のアミノ酸のシグナルペプチド、及びmature蛋白まで174個のアミノ酸より成る前駆体蛋白が存在しており、サ-モリシンと活性中心のアミノ酸が類似してた。一方、アルカリ性プロテア-ゼと60%以上の高い相同性を持っていた。現在、両蛋白質にsite-directed mutagenesisのう方法を使用し、酵素の活性のアミノ酸を変え、抗原性を残したまま、酵素活性無い蛋白を作成し、これがワクチンとして使用できるか否かを検討している。

In recent years, 従 to weak toadstool と mesh さ れ て き た line pus bacteria, coliform, セ ラ チ ア の, day and see a infection を up こ す disease causes の の clinical importance が raised し て い る. Today back to の research は そ れ ら microorganism の produce す る kind 々 の factor の う ち, main infectious を に し て い る を protein molecules, molecular but 伝 learn な surface か ら interpret し た. Specific に に, pathogenic pseudomonas aeruginosa ある (Ps aeruginosa IFO 3455) の produce す る エ ラ ス タ - ゼ and び ア ル カ リ sex プ ロ テ ア - ゼ の heritage 伝 を drew し, time に そ の DNA の salt base with column ま で し, time に は active site の he enzyme と の phase gay の を see し, enzyme properties を detailed に beg す 検 る こ と を purpose と し て line っ た. こ れ ら take り out し た heritage 伝 を, プ ロ テ ア ゼ, エ ラ ス タ - ゼ not produce pseudomonas bacteria に import し, そ の virulency に and ぼ す influence も exam え る. I 々 が ク ロ ン to し て, そ の DNA match column を decided し た results は, ア ミ ノ acid with column よ り, said protein コ - が ド field 903 bp, ア ミ ノ acid residue 301, molecular weight 32.926 で は あ っ た. Again, 23 の ア ミ ノ acid の シ グ ナ ル ペ プ チ ド and び said protein ま で 174 の ア ミ ノ acid よ り into previous る 駆 body protein が し て お り, サ モ リ シ ン と active center の ア ミ ノ acid が similar し て た. One party, ア カリ カリ sex プロテア-ゼと more than 60% <s:1> high ア similarity を holds って た た. Now, that struck protein に site - directed mutagenesis の を う method using の し, enzyme activity の ア ミ ノ acid を - え, antigenicity を residual し た ま no い ま, enzyme activity protein を し, consummate こ れ が ワ ク チ ン と し て use で き る か no か を beg し 検 て い る.

项目成果

J.Fukushima,S.Kawamoto,and K.Okuda: "Complete amino acid sequenci and structural gene of the elastase from Pseudomonas aeruginosa IFO 3455" J.Bacteriol. 171. 1698-1704 (1989)

J.Fukushima、S.Kawamoto 和 K.Okuda：“来自铜绿假单胞菌 IFO 3455 的弹性蛋白酶的完整氨基酸序列和结构基因”J.Bacteriol。

S.Kawamoto,K.Okuda: "Molecular cloning and nucleotide sequence of rat brain argino-succinate lyase cDNA with an extremely long 5'-untranslated sequence:evidence for the identity of the brain and liver enzymes." Mol.Brain Res.5. 235-241 (1989)

S.Kawamoto、K.Okuda：“具有极长 5-非翻译序列的大鼠脑精氨酸琥珀酸裂解酶 cDNA 的分子克隆和核苷酸序列：脑和肝酶身份的证据。”

J.Fukushima,S.Kawamoto,and K.Okuda: "Molecular Cloning of The Collagenase Gene of Vibrio Alginolyticus Chemovar Iophagus" J.Bacteriol.

J.Fukushima、S.Kawamoto 和 K.Okuda：“溶藻弧菌 Chemovar Iophagus 胶原酶基因的分子克隆”J.Bacteriol。

Y.Atsumi,and K.Okuda: "Cloning and expression of the alkaline proteinase gene from Psendomonas aeruginosa IFO 3455" J.Bacteriol. 171. 3173-3175 (1989)

Y.Atsumi 和 K.Okuda：“铜绿假单胞菌 IFO 3455 碱性蛋白酶基因的克隆和表达”J.Bacteriol。

K.Morihara,J.Fukusima,K.Okuda: "Primary Structure of Pseudomonas-Aeruginosa Elastase-A Comparison with Thermolysin" Pseudomonas Aeruginosa Infection. 42. 36-41 (1989)

K.Morihara，J.Fukusima，K.Okuda：“铜绿假单胞菌弹性蛋白酶的一级结构 - 与嗜热菌蛋白酶的比较”铜绿假单胞菌感染。