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緑膿菌の産生する病原性因子エラスターゼ,アルカリプロテアーゼの分子生物学的研究

铜绿假单胞菌毒力因子弹性蛋白酶和碱性蛋白酶的分子生物学研究

基本信息

批准号：
04670249
负责人：
奥田研爾
金额：
--
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

緑膿菌の病原因子であるエラスターゼとアルカリプロテアーゼの発現制御について、研究を行っている。本年度我々は、エラスターゼのプロモータ領域を詳しく解析するために、まず、プライマーエクステンション実験により、転写開始点を決定した。つぎに、プロモーター領域を様々な大きさに分け、それらをクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)の上流に組換え、発現実験を行なった。これらの実験により、エラスターゼの発現に必要なプロモーター構造が明かとなり、またその上流で少なくとも3つの転写を活性化しているシス配列が存在することが分った。一方我々は、すでにエラスターゼ遺伝子の発現を制御していることが分かっているLasRの遺伝子をPCRによりクローン化し、大腸菌で大量に発現させることに成功した。現在このLasRがエラスターゼ上流のどの位置に結合しているかを調べている。また、昨年度報告した、エラスターゼの活性部位に変異を持つ遺伝子を緑膿菌で発現させ、その遺伝子産物の分泌について研究を行なった。この結果、エラスターゼ前駆対は自己分解により活性化され、分泌は、自己分解と協調して起ることが示唆された。一方、アルカリプロテアーゼのプロモーターについても、プロモーターの同定を行なった。アルカリプロテアーゼのプロモーターはFurという転写因子を介して培地中の鉄イオンによりその発現が制御されていることが示唆される結果を得た。一方、変異型エラスターゼタンパク質の感染防御作用への影響を調べたところ、効果があることが、マウスの腹腔内接種実験、および、角膜への接種実験より明らかになった。

The pathogenic factors of Pseudomonas aeruginosa were studied and developed. This year, we decided on the starting point of the project. The upper part of CAT is composed of the following parts: (1) The upper part of CAT is composed of the upper part of CAT and the lower part of CAT is composed of the upper part of CAT and the lower part of CAT is composed of the upper part of CAT and the lower part of CAT is composed of the upper part of CAT and the lower part of CAT. The structure of the structure is clear, the upper flow is small, and the structure of the structure is active. One of the successful ways to control the production of LasR gene is to control the PCR of LasR gene, and to control the production of Escherichia coli. Now the LasR is in the middle of the stream. In addition, the study on the development of Pseudomonas aeruginosa and secretion of its active site was carried out in the last annual report. The result of this is that the enzyme is activated, secreted, decomposed and coordinated. A party, a party The results of the experiment were obtained by analyzing the factors of iron and iron in the soil. The infection prevention effect of different types of bacteria is regulated by the effect of intraperitoneal inoculation, corneal inoculation and so on.