ハンチントン舞踏病およびアルツハイマ-病におけるトランスジェニック・マウスの開発

亨廷顿舞蹈病和阿尔茨海默病转基因小鼠的开发

基本信息

批准号：
03670573
负责人：
松村裕
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hyogo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ハンチントン舞踏病とアルツハイマ-病に関するトランスジェニック・マウスを作成することを研究の目的としたが、本年度は、今後の研究展開のための、基本的問題の解決に必要な準備的研究に留った。1)ハンチントン舞踏病5例と家族性アルツハイマ-病2例の臨床遺伝的特性を検討すべく、末梢血が溶血させた後、Protease KにてDNAを単離精製し、それを、Sendaiウィルスに組み込み、培養細胞に感染させ保存し今後の研究の準備を行なった。2)アルツハイマ-病のモデルとしてのトランスジェニック動物作成のために、アミロイド前駆体蛋白(APP)を日本遺伝子バンクより取り寄せ、その大腸菌のプラスミドの中に組み込まれているcDNAをとり出すため大腸菌を増殖せしめた。Protease Kによって細胞融解をおこない、セシウムによる濃度勾配法にて更に大腸菌のDNAとプラスミドのそれと分離したのち、プラスミドのDNAを制限酵素にて切断し、APPーcDNAを純粋に精製した。一方、APPのN末端より40塩基の部分を入手し得たので、N末端の部分とAPPを制限酵素にて切断した部分とを用いてPCR法にて、各種のDNAを作成した。それらのDNAを受精卵に注入すべく準備した。受精卵の採取は褐色マウス(3CH/HeJce)について行なった。まずPMSGを腹腔注射し、その2日後hCGを腹腔注射、その後交配せしめて受精卵を採取した。実験操作した受精卵は白色マウス(Jce/MCH)の子宮内に移植し、個体発生を生じせしめるべく試みたが、現在までの所、胎仔を得るには至っていない。その理由は明らかではないが、今後、この受精卵の採取から子宮内に移植するまでの技術的な因難を克服する必要があるものと考えている。以上、主としてアルツハイマ-病の動物モデルとして遺伝子にβ/A4蛋白を組みこんだトランスジェニック・マウスの作成を試みている段階である。

这项研究的目的是创建与亨廷顿的舞蹈和阿尔茨海默氏病有关的转基因小鼠，但是今年，我们只专注于为未来研究发展解决基本问题所必需的准备研究。 1）为了研究五例亨廷顿舞厅的临床遗传特征和两例家族性阿尔茨海默氏病的临床遗传特征，将外周血血液溶解，并使用蛋白酶K分离并纯化DNA，并使用蛋白酶K进行纯化，这些蛋白酶被掺入仙台病毒中，并被培养的细胞感染，并保存下来，并准备好进行未来的研究。 2）为了创建转基因动物作为阿尔茨海默氏病的模型，从日本基因库订购了淀粉样蛋白前体蛋白（APP），并种植大肠杆菌以提取整合到大肠杆菌质粒中的cDNA。使用蛋白酶K进行细胞裂解，并使用纤维化方法使用Cesium进行浓度梯度方法进一步分离质粒后，用限制性酶将质粒的DNA裂解，然后将App-CDNA纯化。另一方面，获得了从APP的N末端获得40个碱基的一部分，并使用N-terminus的部分和APP用限制性酶切割APP的部分通过PCR制备了各种DNA。准备将DNA注射到受精卵中。在棕色小鼠（3CH/HEJCE）上收集受精卵。首先，对PMSG进行了腹膜注射，两天后，HCG被腹膜注射，然后繁殖以收集受精卵。实验工程的受精卵被植入白鼠的子宫（JCE/MCH），并试图引起本体发育，但迄今为止，尚未获得胎儿。造成这种情况的原因尚不清楚，但我们认为，将来我们将需要克服从收集受精卵到子宫植入的技术困难。这是我们试图创建转基因小鼠的阶段，将β/A4蛋白纳入其基因中，作为阿尔茨海默氏病的动物模型。