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ハンチントン舞踏病およびアルツハイマ-病におけるトランスジェニック・マウスの開発

亨廷顿舞蹈病和阿尔茨海默病转基因小鼠的开发

基本信息

批准号：
03670573
负责人：
松村裕
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hyogo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ハンチントン舞踏病とアルツハイマ-病に関するトランスジェニック・マウスを作成することを研究の目的としたが、本年度は、今後の研究展開のための、基本的問題の解決に必要な準備的研究に留った。1)ハンチントン舞踏病5例と家族性アルツハイマ-病2例の臨床遺伝的特性を検討すべく、末梢血が溶血させた後、Protease KにてDNAを単離精製し、それを、Sendaiウィルスに組み込み、培養細胞に感染させ保存し今後の研究の準備を行なった。2)アルツハイマ-病のモデルとしてのトランスジェニック動物作成のために、アミロイド前駆体蛋白(APP)を日本遺伝子バンクより取り寄せ、その大腸菌のプラスミドの中に組み込まれているcDNAをとり出すため大腸菌を増殖せしめた。Protease Kによって細胞融解をおこない、セシウムによる濃度勾配法にて更に大腸菌のDNAとプラスミドのそれと分離したのち、プラスミドのDNAを制限酵素にて切断し、APPーcDNAを純粋に精製した。一方、APPのN末端より40塩基の部分を入手し得たので、N末端の部分とAPPを制限酵素にて切断した部分とを用いてPCR法にて、各種のDNAを作成した。それらのDNAを受精卵に注入すべく準備した。受精卵の採取は褐色マウス(3CH/HeJce)について行なった。まずPMSGを腹腔注射し、その2日後hCGを腹腔注射、その後交配せしめて受精卵を採取した。実験操作した受精卵は白色マウス(Jce/MCH)の子宮内に移植し、個体発生を生じせしめるべく試みたが、現在までの所、胎仔を得るには至っていない。その理由は明らかではないが、今後、この受精卵の採取から子宮内に移植するまでの技術的な因難を克服する必要があるものと考えている。以上、主としてアルツハイマ-病の動物モデルとして遺伝子にβ/A4蛋白を組みこんだトランスジェニック・マウスの作成を試みている段階である。

The purpose of this study is to prepare for future research and solve basic problems. 1) Clinical characteristics of 5 cases of familial disease and 2 cases of familial disease were discussed. DNA isolation, purification, preservation and preparation for future research were carried out after hemolysis in peripheral blood. 2) The expression of protein precursor (APP) in E. coli was detected by PCR and the expression of cDNA was detected by PCR. Protease K is used for cell melting, concentration matching, restriction enzyme cleavage and purification of DNA from Escherichia coli. The N-terminal part of APP was obtained by PCR and the N-terminal part of APP was cut by restriction enzyme. The DNA of the fertilized egg was injected into the cell. The fertilized egg is taken brown (3CH/HeJce) PMSG is injected intraperitoneally, hCG is injected intraperitoneally 2 days later, and fertilized eggs are collected after mating. In the womb, the fertilized egg is transplanted, the individual is born, and the fetus is born. The reasons for this are clear, future and technical difficulties in the adoption of fertilized eggs, intrauterine transplantation and the need to overcome them. The above, the main body of the disease animal, the main body of the disease animal