巨大DNA断片特異的PCRによる家族性アルツハイマ-病遺伝子の追究

使用大 DNA 片段特异性 PCR 追踪家族性阿尔茨海默病基因

• 批准号: 02240213
• 负责人: 清水 信義
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-02240213/
• 关键词: 巨大DNA断片; 第21染色体; セルソ-タ-; パルスフィ-ルド電気泳動; PCR; SOD; APP; 早発型家族性アルツハイマ-病遺伝子(AD1)

常染色体優性遺伝の早発型家族性アルツハイマ-病遺伝子(AD1)をクロ-ニングするために2つの方向からアプロ-チを試みている。1つは現在までにAD1との最も密接な連鎖が報告されているD21S16周辺から新たに多数のDNAマ-カ-を分離することである。このために、ヒトBリンパ球培養細胞からセルソ-タ-を用いてソ-ティングした純粋な第21染色体から巨大DNAを損傷なく抽出し、<Not>___/Iなどの低頻度切断制限酵素で切断後生じた巨大DNA断片をパルスフィ-ルド電気泳動で分離、次に目的とする巨大DNA断片に特異的なクロ-ンをPCRを用いて増幅しクロ-ニングする技術(ショットガンPCR)の確立を試みた。<Alu>___/PCRでは単一コピ-配列のものはほとんど得られなかったが、巨大DNA断片をさらに<Nsp>___/(7524)Iを用いて小断片化し、合成DNAアダプタ-を連結後PCRで増幅する方法では、プロ-ブとして有効なクロ-ンを得られるようになった。もう1つのアプロ-チはメンブレン上に固定した第21染色体DNAへの特異的なハイブリダイゼ-ションとPCRによる増幅を利用して、脳cDNAライブラリ-からAD1候補遺伝子のcDNAをクロ-ニングするというものである。サザンブロット法を用いてハイブリダイゼ-ションの前後でのcDNAの構成比を解析した結果、(1)第21染色体にマップされている遺伝子由来のcDNA(SOD、S100β、APP)はすべて濃縮されており、同時に構成比の均一化の傾向が認められた。(2)他の染色体由来のcDNA(脳型クレアチンキナ-ゼ、ATP合成酵素βサブユニット)はいずれも顕著に減少した。(3)高頻度反復配列(<Alu>___/:5×10^5コピ-、<Kpn>___/Iファミリ-:1×10^4コピ-)を含むcDNA及び28SrRNA由来のcDNAの構成比にはほとんど変化が認められなかった。現在、得られたcDNAクロ-ンの性状を解析中である。

Autosomal sex disorder, early onset familial disease, hereditary disease (AD1), dysphagia, herpes 2, direction, constipation, constipation. 1 "now" AD1 "most closely linked" reports "D21S16 week"new"majority" DNA-"Separation"isolation"please". I don't know, I don't know. After the enzyme is cut off, the large DNA fragments are separated by electrophoresis, and the second purpose is to separate the large DNA fragments. The PCR is used to make sure that the test device is tested. The first step of this paper is to make sure that the lt;Alu>___/PCR fragments can be obtained by using small fragments, synthesize DNA fragments, and then use the PCR method to improve the performance of the system. In the case of chromosome 21, the DNA of chromosome 21 was fixed, and the width of the PCR was used. The width of the PCR was used, the cDNA was used, the AD1 was waiting for the child, and the cDNA was detected. The results of cDNA analysis were compared. (1) the origin of chromosome 21 (SOD, S100 β, APP) was homogenized and homogenized at the same time. (2) the genesis of other chromosomes: cDNA (phenotype, β-synthase, ATP synthesis enzyme, β-lactamase). (3) High-precision inverse configuration (& lt;Alu>___/:5 × 10 ^ 5 -, & lt;Kpn>___/I--: 1 × 10 ^ 4 -) contains cDNA and the origin of 28SrRNA. CDNA is in proportion to the size of each other. At present, it is in the process of analyzing the characteristics of cDNA traits.

项目成果

Shinsei Minoshima: "Flowーsorting of human chromosome 22 derivatives for physical mapping and fine structure analysis." <In>___/ Proceedings of the International Symposium on Flow Cytometry and Image analysis for Clinical Applications,<Elsevir>___/ <Scienc

Shinsei Minoshima：“用于物理绘图和精细结构分析的人类 22 号染色体衍生物的流式分类。<In>___/国际流式细胞术和临床应用图像分析研讨会论文集，<Elsevir>___/<Scienc”

Nobuyoshi Shimizu: "Gene mapping and fine structure analysis of the human genome using flowーsorted chromoes." <In>___/ Advanced Techniques in Chromosome Research,<Mercel>___/ <Dekker>___/ <Inc>___/.(1990)

Nobuyoshi Shimizu：“使用流式排序染色体对人类基因组进行基因定位和精细结构分析。”<In>___/染色体研究高级技术，<Mercel>___/ <Dekker>___/ <Inc>___/。（1990 年） ）

Nobuyoshi Shimizu: "Molecular strategies for physical mapping and fine structure analysis of flowーsorted human chromosome 21." <In>___/ Proceedings for the First Interunational Confernce on Electrophoresis,Supercomputing and the Human Genome,<World>___/ <

Nobuyoshi Shimizu：“流式排序人类 21 号染色体物理作图和精细结构分析的分子策略。<In>___/ 第一届国际电泳、超级计算和人类基因组会议论文集，<世界>___/ <

Shinsei Minoshima: "Isolation of giant DNA fragments fragments from flomーsorted human chromosomes." Cytometry. 11. 539-546 (1990)

Shinsei Minoshima：“从弗洛姆分选的人类染色体中分离巨大的 DNA 片段。”11. 539-546 (1990)。