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癌細胞株からの血小板増加因子の分離と解析

癌细胞系中血小板增加因子的分离和分析

基本信息

批准号：
03671178
负责人：
東原正明
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至 1992
项目状态：
已结题

项目摘要

造血因子の中で血小板産生調節因子については未だ分離同定されておらず、不明の点が多い。最近になり、IL-6やIL-11、LIFに巨核球の分化増殖作用があることが発見され実験的にもラット、サルへのin vivo投与にて血小板が増加することが示されている。しかし、実際には投与後の血小板増加作用は著しいものではなく、期待されている血小板増加因子とは異なると言われている。世界中のグループが肺癌や白血病細胞株の産生する巨核球の分化増殖因子などを用いて新しい血小板増加因子の精製を試みている。我々は、この二年間、血小板増多症(100-170万/μl)を伴う腹膜悪性中皮腫患者腹水より細胞株を樹立した。この細胞株を利用して新しい血小板増加因子の精製を試みた。我々は、まずMeg-CSFのin vivoおよびin vitroでのassay系を確立した。次に、この細胞株を用いてヒトまたはマウス巨核球コロニー法で血小板増加因子の巨核球に対する増殖能、分化能を確認しつつ、培養上清より因子の分離精製を試みた。培養上清をまず硫安分画、イオン交換クロマトグラフィにフラクション分けし、確立した三つのassay法にてMeg-CSFあるいわTPOの存在するフラクションを選択した。しかし、末だ単一分にまでは精製できていない。fractionの中にIL-6やleukemia inhibitory factor(LIF)とは異なる因子を含むことを示唆するデータを得ているので、さらにこのプロジェクトを進める予定である。一方、この細胞株のヌードマウスへの移植を試みたが失敗した。我々は、最近、血小板数100万/μlを示す急性骨髄性白血病の患者の末梢血から細胞株を樹立した。この細胞株を用いて、現在同様の実験操作にて血小板調節因子の精製プロジェクトを同時進行させている。

Among the hematopoietic factors, platelet production regulatory factors are not separated and determined, and unknown points are numerous. Recently, IL-6, IL-11 and LIF have been shown to increase the differentiation and proliferation of megakaryocytes in vivo. In fact, the platelet enhancement effect after injection is different from that of the control group. The world's largest number of lung cancer and leukemia cell line production, megakaryocyte differentiation factor, and new platelet-increasing factor purification test In the past two years, cell lines have been established in patients with thrombocytosis (100- 1.7 million/μl) and ascites associated with peritoneal edema. This cell line was used to refine the platelet-enhancing factor. I am not sure whether Meg-CSF is in vivo or in vitro. In addition, this cell line was used to confirm the proliferation and differentiation of platelet-increasing factor by megakaryocyte assay, and the isolation and purification of platelet-increasing factor from culture supernatant was tried. Culture supernatant is a mixture of Meg-CSF and TPO. It is a mixture of Meg-CSF and TPO. It's a little bit more refined. IL-6 and leukaemia inhibitory factor(LIF) in fraction are different from each other. The cell line was transplanted and failed. We recently established peripheral blood cell lines from patients with acute osteoblastic leukemia with platelet counts of 1 million/μl. The purification and purification of platelet regulatory factors are carried out simultaneously in the same operation.