ヘテロサイクリックアミン誘発実験動物腫瘍における遺伝子変化

杂环胺诱导的实验动物肿瘤的遗传变化

• 批准号: 05152150
• 负责人: 長尾 美奈子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05152150/
• 关键词: PhIP; APC; ヘテロサイクリックアミン; genomic instability

PhIP誘発ラット大腸がんにおけるAPC遺伝子変異の関与を明らかにすることを目的とし、先ずラット正常APC cDNAの塩基配列を明らかにした。F344雄ラット肝よりRNAを抽出し、ヒトAPCのヌクレオチド配列をプライマー配列に用いて、RT-PCRで増巾し、direct sequentingでcDNAの全塩基配列を決定した。ヒトと高い相同性を示し、1ケ所に6塩基対の挿入が、他の場所に3塩基対の欠失があった。コーディング領域は、ヒトより3塩基対短かい8526ヌクレオチドで、ヌクレオチドレベルで86.2%、アミノ酸レベルで90.2%の相同性があった。次に得られたラットのヌクレオチド配列に基づいてプライマーを作成し、PCR-SSCP解析によりPhIP誘発ラット大腸がんにおける変異の有無を検討した。2例の腺がんで、コドン1413のGGG部位から1個のG塩基の欠失が検出された。さらにこれら変異のあった腺がんのうち1個にコドン869で同様にGGGから1個のG塩基の欠失が検出された。検出された突然変異がすべてGGGからGGへの変異であったことから、この変異をPhIPのmutational fingerprintとして用いることで出来る可能性がある。次にPhIP誘発大腸がんにおけるgenomic instabilityの関与を、microsatellite probeを用いて検索した。15の異なる染色体に分布する43種類のmicrosatelliteに対するプライマーを用いて、腫瘍DNAをPCRで増巾し変性条件下で泳動した。8例中2例の腫瘍で1繰り返し単位の延長が、少なくとも2つのloci以上で検出された。この事はPhIP大腸発がんにgenomic instabilityが関与していることを示唆するものである。

There 発 lure ラ ッ ト e. が ん に お け る APC heritage 伝 sub - different の masato Ming ら を か に す る こ と を purpose と し, first ず ラ ッ ト normal APC cDNA の salt base with column を Ming ら か に し た. を F344 male ラ ッ ト liver よ り RNA extraction し, ヒ ト APC の ヌ ク レ オ チ ド match column を プ ラ イ マ ー matched with column に い て, rt-pcr で raised towels し, direct sequenting で cDNA の salt base full column を decided し た. Youdaoplaceholder0 high ヒトと homogeneity を indicates を, 1ケ に6 base-pair pair is inserted が, other <s:1> sites に3 base-pair pair is missing があった. コ ー デ ィ ン グ は, ヒ ト よ り 3 salt base short か seaborne い 8526 ヌ ク レ オ チ ド で, ヌ ク レ オ チ ド レ ベ ル で 86.2%, ア ミ ノ acid レ ベ ル で 90.2% の identity が あ っ た. Time に have ら れ た ラ ッ ト の ヌ ク レ オ チ ド match column に base づ い て プ ラ イ マ ー を made し, PCR - SSCP analytic に よ り there 発 lure ラ ッ ト e. が ん に お け る variations have different の without を beg し 検 た. Two cases of <s:1> gland がんで, コド <s:1> 1413 <s:1> GGG site が検 ら, one <s:1> G base <s:1> is deficient が検 された された. さ ら に こ れ ら - different の あ っ た gland が ん の う ち 1 に コ ド ン 869 で with others に GGG か ら の 1 G salt base の owe lost が 検 out さ れ た. 検 out さ れ た suddenly - different が す べ て GGG か ら GG へ の - different で あ っ た こ と か ら, こ の - different を there の mutational fingerprint と し て in い る こ と で possibility out る が あ る. The がんにおけるgenomic instability of the large intestine induced by にPhIP is closely related to を, and the microsatellite probeを used <s:1> て検 to determine た. 15 の different な る chromosome に distribution す る 43 species の microsatellite に す seaborne る プ ラ イ マ ー を with い て, swollen sores DNA を PCR で raised wipes し bathing - sex condition で し た. Among the 8 cases, 2 cases had a で abscess, 1 involuct, 単 position, <s:1> elongation が, and a decrease in なくと <e:1>. 2 <s:1> more than loci で検 protrusion された. は こ の things there e. 発 が ん に genomic instability が masato and し て い る こ と を in stopping す る も の で あ る.

项目成果

Ushijima,T.,Nagao,M.et al.: "Infrequent mutation of Ha-ras and p53in rat mammary carcinomas induced by PhIP"

Ushijima,T.,Nagao,M.等人：“PhIP 诱导的大鼠乳腺癌中 Ha-ras 和 p53 的罕见突变”

Makino,H.,Nagao,M.et al.: "Absence of p53 mutations in ratcolon tumors induced by 2-amino-6-methyldipyrido-〔1,2-a:3',2'-d〕imidazole,2-amino-3-methylimidazo〔4,5-f〕quinoline,or 2-amino-1-methyl-6-phenylimidazo〔4,5-b〕pyridine" Jpn.J.Cancer Res.,. (in press).

Makino, H., Nagao, M. 等人：“2-氨基-6-甲基联吡啶-[1,2-a:3,2-d]咪唑,2-诱导的大鼠结肠肿瘤中不存在 p53 突变氨基-3-甲基咪唑[4,5-f]喹啉，或2-氨基-1-甲基-6-苯基咪唑[4,5-b]吡啶”Jpn.J.Cancer Res.,.（出版中）。

Kakiuchi,H.,Nagao,M.et al: "Rare frequency of activation ofthe Ki-ras gene in rat colon tumors induced by heterocyclic amines: possible alternative mechanisms of human colon carcinogenesis" Molecular Carcinogenesis. 8. 44-48 (1993)

Kakiuchi, H., Nagao, M. 等人：“杂环胺诱导的大鼠结肠肿瘤中 Ki-ras 基因的罕见激活频率：人类结肠癌发生的可能替代机制”分子癌发生。

Ushijima,T.,Nagao,M.et al.: "Genetic alterations in HCA-induced tumors.in Proceedings of 23rd Princess Takamatsu Symposium" Princeton Scientific Publication Co.,Inc.,Princeton,NJ,in press,

Ushijima,T.,Nagao,M.等人：“HCA 诱导肿瘤的遗传改变。第 23 届高松公主研讨会论文集”普林斯顿科学出版有限公司，新泽西州普林斯顿，正在印刷中，

Nagao,M.and Sugimura,T.: "Carcinogenic factors in food with relevance to colon cancer development" Mutat.Res.290. 43-51 (1993)

Nagao,M. 和 Sugimura,T.：“食品中与结肠癌发展相关的致癌因素”Mutat.Res.290。