ヘテロサイクリックアミン誘発実験動物腫瘍における遺伝子変化

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PhIP誘発ラット大腸がんにおけるAPC遺伝子変異の関与を明らかにすることを目的とし、先ずラット正常APC cDNAの塩基配列を明らかにした。F344雄ラット肝よりRNAを抽出し、ヒトAPCのヌクレオチド配列をプライマー配列に用いて、RT-PCRで増巾し、direct sequentingでcDNAの全塩基配列を決定した。ヒトと高い相同性を示し、1ケ所に6塩基対の挿入が、他の場所に3塩基対の欠失があった。コーディング領域は、ヒトより3塩基対短かい8526ヌクレオチドで、ヌクレオチドレベルで86.2%、アミノ酸レベルで90.2%の相同性があった。次に得られたラットのヌクレオチド配列に基づいてプライマーを作成し、PCR-SSCP解析によりPhIP誘発ラット大腸がんにおける変異の有無を検討した。2例の腺がんで、コドン1413のGGG部位から1個のG塩基の欠失が検出された。さらにこれら変異のあった腺がんのうち1個にコドン869で同様にGGGから1個のG塩基の欠失が検出された。検出された突然変異がすべてGGGからGGへの変異であったことから、この変異をPhIPのmutational fingerprintとして用いることで出来る可能性がある。次にPhIP誘発大腸がんにおけるgenomic instabilityの関与を、microsatellite probeを用いて検索した。15の異なる染色体に分布する43種類のmicrosatelliteに対するプライマーを用いて、腫瘍DNAをPCRで増巾し変性条件下で泳動した。8例中2例の腫瘍で1繰り返し単位の延長が、少なくとも2つのloci以上で検出された。この事はPhIP大腸発がんにgenomic instabilityが関与していることを示唆するものである。