エンドセリン誘発収縮に関与する新しい因子の検索とそのクローニング

寻找参与内皮素诱导收缩的新因子及其克隆

• 批准号: 05404019
• 负责人: 真崎 知生 (1995)
• 金额: $ 17.73万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 1995
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05404019/
• 关键词: エンドセリン; エンドセリン受容体; カルシウムチャネル; 非選択的カチオンチャネル; G蛋白質; カルシウム; カルシウムインフラックス; メフェナム酸; カルシウム拮抗薬; 一酸化窒素

エンドセリン(ET)による血管平滑筋収縮の機構については、かなり以前にホスホリパーゼCの活性化によるイノシトールトリスリン酸産生増加によるカルシウムイオン放出と、電位依存性カルシウムチャネルの活性化による外液カルシウムイオン流入が重要であることを指摘した。しかしこれらの系はいずれもET濃度が高い時におこる現象であり生理的なET濃度ではおこりにくいことがわかった。さらに生理的なET濃度では非選択的カチオンチャネルが活性化されこれを通ってカルシウムイオンの流入がおこることがわかった。これがET誘発血管収縮の重要な機構と考えられる。本年度はこのチャネルのcDNAクローニングを試み、いくつかのクローンの採取した。現在そのクローンを検討中である。さらに本年度はエンドセリン受容体の構造とそれにカップルするG蛋白質の検討を行った。その結果GαsはET_Aの第二細胞内ループに、GαiはET_Bの第三細胞内ループに、またGαqは両ET受容体のC末端部に結合することがわかった。それぞれのG蛋白質は異なった構造に結合することがわかった。しかし、それぞれのG蛋白質のcDNAをCOS細胞にトランスフェクトさせ、細胞内のG蛋白質レベルを上昇させるとGαsもET_Bに、GαiもET_Aにカップルすることがわかった。これらの事実はET受容体のサブタイプのはGαs,GαiそれぞれのG蛋白質に対する親和性の差で説明出来ると思われる。

The mechanism of vascular smooth muscle contraction is characterized by the increase of acid generation, potential dependence, activation, and inflow of external fluid. When ET concentration is high, ET concentration is physiological. The physiological concentration of ET is not selected. This is an important mechanism for the development of vascular contractions. This year, we will try to collect and collect cDNA from different sources. Now we're talking about it. This year, we have been discussing the structure of the receptor and the development of the G protein. As a result, Gαs binds to the second intracellular region of ET_A, Gαi binds to the third intracellular region of ET_B, and Gαq binds to the C-terminal region of ET receptor. The G protein is structurally different. In addition, the expression of G protein in COS cells and G protein in cells has increased. This explains the difference in affinity between Gαs,Gαi and G protein in ET receptors.

项目成果

Sakamoto,A.: "Distinct subdomains of human endothelin receptors determine their selectivity to endothelinA-selective antagonist and endothelinB-selective agonists" J.Biol.Chem.268. 8547-8553 (1993)

Sakamoto,A.：“人内皮素受体的不同亚结构域决定了它们对内皮素 A 选择性拮抗剂和内皮素 B 选择性激动剂的选择性”J.Biol.Chem.268。

Y.Takagi: "Structural basis of G Protein specificity of human endothelin receptors:a study with endothelin A/B chimeras." J.Biol.Chem.(in press).

Y.Takagi：“人内皮素受体 G 蛋白特异性的结构基础：内皮素 A/B 嵌合体的研究。”

Giaid,A.: "Expression of endothelin-1 in the lungs of patients with pulmonary hypertension" N.Eng.J.Med.328. 1732-1739 (1993)

Giaid,A.：“肺动脉高压患者肺部内皮素-1 的表达”N.Eng.J.Med.328。

Sakamoto,A.: "Pseudo-noncompetitive antagonism by BO-123 of intracellular calcium transients mediated by human ET_A endothelin receptor" Biochem.Biophys.Res.Commun.(in press). (1994)

Sakamoto,A.：“BO-123 对人 ET_A 内皮素受体介导的细胞内钙瞬变的伪非竞争性拮抗作用”Biochem.Biophys.Res.Commun.（出版中）。

T.Enoki: "Long-lasting activation of cation current by endothelin-1 in smooth muscle cells of rabbit aorta and mouse fibroblasts." Brit.J.Pharmacol.(in press).

T.Enoki：“内皮素-1 在兔主动脉和小鼠成纤维细胞的平滑肌细胞中持久激活阳离子电流。”