マメ科植物を冒すウイルスの病原遺伝子の解析と診断への応用

影响豆类病毒的致病基因分析及其在诊断中的应用

• 批准号: 05760043
• 负责人: 佐野 義孝
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 1994
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760043/
• 关键词: 植物ウイルス; 遺伝子診断法

ダイズの重要病害ウイルスであるダイズモザイクウイルス(SMV)は種子伝染性であり、その病原型から5系統に分類されているが、血清学的診断法による識別が困難である。本年度は、SMV2系統(SMV-B及び-C系統)について、既に解析された外被タンパク領域の遺伝子構造(塩基配列)をもとに、遺伝子診断法の確立を図った。SMV-B及びC系統は團場での多発が報告されており、塩基配列も90%以上の相同性を持つ。そこで2系統間で共通な2ケ所の塩基配列からSMVに特異的なプライマーを作製し、PCR法により解析したところ、何れのSMV系統においても感染葉からウイルス遺伝子断片が増幅されることを確認した。さらに一般團場から採集したSMV感染ダイズ葉を、このPCR法の他、従来より行われているELISA法(酵素結合抗体法)及びDIABA(Dot Immuno Binding Assay)により診断・比較したところ、ELISA及びDIBAでは陰性であった検体からもPCR法によりウイルスが検出された。さらに、増幅されたウイルス遺伝子断片の中で、B及びC2系統間で塩基配列の異なる部分に特異的なDNAプローブを各々作製し、ハイプリダイゼーション法により、増幅されたウイルス遺伝子からその系統を判別することが可能であることを確認した。以上の事から、PCRを用いた本遺伝子診断法は、高感度であるのみならず、ウイルス系統の固定・識別も可能であることから、今後、原種採取團場における健全大豆種子(ウイルスフリー種子)の育成に、とりわけ有用であると思われる。これらの成果については、平成5年度北陸病害虫研究会において発表し、現在論文準備中である。

ウ ダ イ ズ の important diseases イ ル ス で あ る ダ イ ズ モ ザ イ ク ウ イ ル ス (SMV) は seed 伝 dyeing で あ り, そ の disease prototype か ら 5 classification system に さ れ て い る が, serological diagnosis method に よ る recognition difficulty が で あ る. This year は, SMV2 system (SMV) - B and び - C system に つ い て, both に analytic さ れ た outside be タ ン パ ク field の heritage 伝 sub structure (salt with column) を も と に, but 伝 diagnostics の establish を 図 っ た. The SMV-B and びC system <s:1> regiments で <e:1> have multiple が reports されてお <e:1>, and over 90% of the <s:1> of the base allocation is similar を support び. そ こ で 2 system between common で な 2 ケ の salt base with column か ら SMV に specific な プ ラ イ マ ー を cropping し, PCR method に よ り parsing し た と こ ろ, れ の SMV system に お い て も infected leaf か ら ウ イ ル ス heritage 伝 son fragment が rights of さ れ る こ と を confirm し た. さ ら に general herd か ら acquisition し た SMV infection ダ イ ズ leaf を, こ の PCR method の he, 従 よ り line わ れ て い る ELISA method combined with antibody technique (enzyme) and び DIABA (Dot Immuno Binding Assay) に よ り diagnosis, comparison し た と こ ろ, ELISA and び DIBA で は negative で あ っ た 検 body か ら も PCR method に よ り ウ イ ル ス が 検 out さ れ た. さ ら に, rights of さ れ た ウ イ ル ス posthumous son 伝 fragment の で, B and び C2 system between で salt base with column の different な る part に specific な DNA プ ロ ー ブ を し the 々 cropping, ハ イ プ リ ダ イ ゼ ー シ ョ ン method に よ り, rights of さ れ た ウ イ ル ス posthumous son 伝 か ら そ の system を discriminant す る こ と が may で あ る こ と を confirm し た. Above の matter か ら, PCR を い た this heritage 伝 son diagnostics は, Gao Gan で あ る の み な ら ず, ウ イ ル ス system の fixed, identify も may で あ る こ と か ら foundation seed to herd, in the future, に お け る sound soybean seeds (ウ イ ル ス フ リ ー seeds) の に bred, と り わ け useful で あ る と think わ れ る. The achievements of the れら れら れら are に に て て て て, the report of the Hokuriku Pest and Disease Research Society in Heisei 5 is に, and the paper is currently being prepared である.

项目成果

村山貴之: "新潟県おけるダイズウイルス病に関する研究(第7報)遺伝子増幅法によるダイズモザイクウイルス(SMV)の検出" 第46回北陸病害虫研究会講演要講. 14- (1994)

村山隆之：“新泻县大豆病毒病的研究（第7次报告）通过基因扩增法检测大豆花叶病毒（SMV）”第46届北陆害虫研究会演讲摘要14-（1994年）。