高等動物におけるビタミンB_<12>補酵素合成機構の解明

高等动物维生素B_<12>辅酶合成机制的阐明

• 批准号: 05760116
• 负责人: 渡辺 文雄
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hagoromo Gakuen Junior College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760116/
• 关键词: ビタミンB_<12>; アデノシルコバラミン; メチルコバラミン; シトクロムP450レダクターゼ; シトクロムb5レダクターゼ; シトクロムb5; ミトコンドリア; ラット

ラット肝臓ミトコンドリア膜画分からビタミンB_<12>補酵素の合成に関与するNADH型およびNADPH型アクアコバラミンレダクターゼを精製し、その酵素化学的物質を解明した。NADPH型酵素はミトコンドリア膜より1%Triton X-100/1%デオキシコール酸で完全に可溶化され、各種クロマトグラフィーを用いて電気泳動的に均一にまで精製した。本酵素は分子量65000の単一のポリペプチドからなるフラボプロテインであった。酵素1モルあたり1モルのFADとFMNを含有していた。また、本酵素はミクロソームのシンクロムP450レダクターゼ(ミクロソームのNADPH型アクアコバラミンレダクターゼ)抗体と反応したが、ペプチドマッピングやフェノバルビタール誘導の挙動の相違から両酵素は異なるタンパク質であることが明らかとなった。一方、NADH型アクアコバラミンレダクターゼは1%TritonX-100で完全に可溶化されたが、DEAE-セファロースカラムクロマトグラフィーにより活性が顕著に消失したが、NADH-シトクロムcレダクターゼ(b-タイプシトクロムとシトクロムb5レダクターゼ複合体)活性とアクアコバラミンレダクターゼ活性は同一の挙動を示した。また、ミトコンドリア膜画分よりb-タイプシトクロムとシトクロムb5レダクターゼをそれぞれ精製し、再構成実験を行った結果、非常に高いアクアコバラミンレダクターゼ活性が検出された。これらの結果よりミトコンドリアのNADH型アクアコバラミンレダクターゼはb-タイプシトクロムとシトクロムb5レダクターゼ複合体であると結論した。

The membrane painting was divided into two parts: B _ & lt;12> enzyme synthesis and NADH enzyme synthesis. The NADPH-type enzyme membrane is coated with 1%Triton X-ray film. 1% sodium chloride is completely soluble, and all kinds of electrophoretic agents are used for electrophoretic electrophoresis. This enzyme has a molecular weight of 65000. The enzyme has a molecular weight of 65000. Enzyme 1, enzyme 1, FAD, FMN, contains antioxidants. The antibodies against P450, NADPH, NADPH, P450, P450, NADPH, NADPH, NADPH On the one hand, nadh type is not soluble. The 1%TritonX-100 is completely soluble. The DEAE- is completely soluble and active. The activity of NADH- is the same as that of B5. The activity of the complex is the same as that of the control. The film painting is divided into two parts: the film painting, the film painting, the film painting The results of this study are as follows: the results show that the NADH type is not available in the first place, and the results are similar to those of the NADH type. please do not know how to do this.