還元型ビオプテリン依存性GTPシクロヒドロレースIフィードバック調節蛋白質の研究

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フィードバック調節蛋白質がテトラヒドロビオプテリン(BH_4)存在下にGTPシクロヒドロレースIと複合体を形成する性質を利用して、本調節蛋白質を精製した。-70℃に保存したラット肝をプロテアーゼインヒビターを含んだ緩衡液でホモゲナイズ後、超遠心を行い、10万g上清液を得た。この液をろ過後、DEAEト-ヨ-パール樹液にとおし、0.15MのNaClを含む緩衡液で溶出した。次に、GTPシクロヒドロレースIとマルトースを結合蛋白質との融合蛋白質を発見させた大腸菌の粗抽出液を先の溶出液に加え、次にGTPとBH_4を加えた。この溶液をアミロースカラムに流した。即ち、フィードバック調節蛋白質はマルトース結合蛋白質と融合したGTPシクロヒドロレースI活性をもBH_4存在下に阻害するので、GTPシクロヒドロレースIの場合と同様に複合体を形成すると推定し、かつこの複合体は、そのマルトース結合蛋白質部分を介してアミロースに結合すると確定した。事実GTPシクロヒドロケースI活性およびフィードバック調節蛋白質の持つ阻害活性てもにカラムに吸着され、かつマルトースで特異的に溶出された。次に、この溶出液を濃縮後、大腸菌由来のマルトース結合蛋白質を除くため、BH_4存在下でゲルろ過を行い、融合蛋白質とフィードバック調節蛋白質の複合体を得た。この溶出蛋白質をBH_4非存在下にてゲルろ過を行ったところ、分子量35,000に相当する溶出位置に、GTPシクロヒドロレースI活性をBH_4存在下に阻害する活性が単一ピークで溶出した。溶出画分の阻害活性のピークはその280nmのピークと一致していた。現在この画分の蛋白質阻成を検討している。