Chediak-Higashi症候群におけるCキナーゼの異常と遺伝子治療の試み

Chediak-Higashi 综合征的 C 激酶异常和基因治疗尝试

• 批准号: 05770541
• 负责人: 田辺 文憲
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: 山梨医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770541/
• 关键词: Chediak-Higashi症候群; Cキナーゼ; カルパイン

先天性食細胞機能不全を主徴とするChediak-Higashi症候群の動物モデルであるベ-ジュマウスにおいて、細胞内情報伝達に重要なCキナーゼに異常がみられることは既に報告した。すなわち、ベ-ジュマウスの好中球やNK細胞のCキナーゼ活性は、TPA刺激により急速なdown-regulationが生じ、これがNK活性低下やCon A cap形成の異常の原因になっている。ベ-ジュマウスのCキナーゼを正常なラットより精製したmu-calpainと反応させると、正常マウスのCキナーゼよりも急速に分解されることがわかった。このCキナーゼは、現在までalpha、beta、gammaなど数種のsubtypeが知られている。今回私は、ベ-ジュマウスのCキナーゼのどのsubtypeに異常がみられるのかを調べるために、好中球より抽出したCキナーゼをハイドロキシアパタイトカラムによる高速液体クロマトグラフィーで分画した。その結果、正常およびベ-ジュマウスの好中球のCキナーゼは大きなピークと小さなピークの二つに分れた。各Subtypeに特異的なポリクローナル抗体を用いてWestern Blot法を行ったところ、大きなピークはCキナーゼbeta、小さなピークはCキナーゼalphaであることがわかった。そこでマウス脳よりmRNAを抽出し、逆転写反応を利用した遺伝子増幅法(RT-PCR)により正常およびベ-ジュマウスのCキナーゼbetaのcDNAを増幅した。現在、この増幅したcDNAを用い、direct sequence法により塩基配列を解読中で、ベ-ジュマウスのCキナーゼbetaのcDNAに点突然変異があるかどうか解析を行なっている。Chediak-Higashi症候群の遺伝子レベルの異常をベ-ジュマウスを用いて明らかにし、遺伝子治療への手がかりにしたい。

Congenital insufficiency food cells を main 徴 と す る Chediak - の Higashi syndrome animal モ デ ル で あ る ベ - ジ ュ マ ウ ス に お い て, intracellular intelligence 伝 に important な C キ ナ ー ゼ に abnormal が み ら れ る こ と は に report both し た. す な わ ち, ベ ジ ュ マ ウ ス の good ball や NK cell の C キ ナ ー ゼ active は, TPA stimulus に よ り な sharply down - regulation が じ, こ れ が NK activity of low や Con A cap forming abnormal の の reason に な っ て い る. ベ - ジ ュ マ ウ ス の C キ ナ ー ゼ を normal な ラ ッ ト よ り refined し た mu - calpain と anti 応 さ せ る と, normal マ ウ ス の C キ ナ ー ゼ よ り も に rapidly decompose さ れ る こ と が わ か っ た. <s:1> <s:1> Cキナ キナ ゼ ゼ られて, now までalpha, beta, gammaな る several <s:1> subtypes が know られて る る る. Now back to the private は, ベ ジ ュ マ ウ ス の C キ ナ ー ゼ の ど の subtype に abnormal が み ら れ る の か を adjustable べ る た め に, good in ball よ り spare し た C キ ナ ー ゼ を ハ イ ド ロ キ シ ア パ タ イ ト カ ラ ム に よ る high-speed liquid ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー で points draw し た. そ の results, normal お よ び ベ - ジ ュ マ ウ ス の good ball の C キ ナ ー ゼ は big き な ピ ー ク と small さ な ピ ー ク の two つ に points れ た. Each Subtype に specific な ポ リ ク ロ ー ナ を ル antibody with い て Western Blot method line を っ た と こ ろ, big き な ピ ー ク は C キ ナ ー ゼ beta, small さ な ピ ー ク は C キ ナ ー ゼ alpha で あ る こ と が わ か っ た. そ こ で マ ウ ス 脳 よ り mRNA を spare し, inverse planning write 応 を using し た heritage 伝 child rights amplitude method (rt-pcr) に よ り normal お よ び ベ - ジ ュ マ ウ ス の C キ ナ ー ゼ beta の cDNA を rights of し た. Now, こ の rights of し た cDNA を い, direct sequence method に よ り salt base with column を solution 読 で, ベ - ジ ュ マ ウ ス の C キ ナ ー ゼ beta の cDNA に point suddenly - different が あ る か ど う か parsing line を な っ て い る. Son Chediak - traces of Higashi syndrome の 伝 レ ベ ル の abnormal を ベ - ジ ュ マ ウ ス を with い て Ming ら か に し, but 伝 treatment へ の hand が か り に し た い.