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塩基部欠失DNA損傷(脱塩基部位)による突然変異と癌遺伝子活性化に関する研究

碱基缺失DNA损伤（脱碱基位点）引起的突变和癌基因激活研究

基本信息

批准号：
05771965
负责人：
紙谷浩之
金额：
$ 0.58万
依托单位：
University of Occupational and Environmental Health, Japan
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771965/
关键词：
脱塩基部位変異 c-Ha-ras遺伝子発癌遺伝子(癌遺伝子)

项目摘要

最初に、脱塩基部位を含むオリゴヌクレオチドを合成するためのモノマーユニット、フォスフォロダイト体を化学合成した。次に、この化合物をビルディングブロックとして固相亜リン酸トリエステル法により脱塩基部位を含むオリゴヌクレオチドを合成した。配列は、5′ dGCC**CGGTGTGGGCAAGAG 3′ である(*はG又は脱塩基部位であり、この配列はc-Ha-ras遺伝子のコドン11から17に対応する)。このオリゴヌクレオチドをHPLCにより高純度に精製した。オリゴヌクレオチドを数段階の酵素反応によって連結させることにより、ras遺伝子断片の合成を行い、哺乳動物細胞における発現に適したプロモーター(ラウス肉腫ウィルスのLTR)を有するベクターに挿入し、リン酸カルシウム法によりNIH3T3細胞へ導入した。その結果、脱塩基部位を含むras遺伝子を導入した場合にフォーカスの形成が観察された。このことは、脱塩基部位によって変異が生じ、発癌遺伝子であるras遺伝子が活性化されたことを示す。さらに、フォーカスを形成したクローンを単離し、ゲノムDNAの抽出を行い、得られたDNAからPCR(ポリメラーゼチェインリアクション)法によってras遺伝子のみを増幅させ、塩基配列を調べた。その結果、脱塩基部位は修飾部位と隣接部位にアデニンへの変異を引き起こすことが明らかになった。以上、本研究により、哺乳動物細胞中で脱塩基部位が生ずると変異を誘発し、また、そのことが発癌の引き金になっている可能性が明らかになった。

First, the base of the compound contains the base of the compound. In addition, this compound can be synthesized by solid-phase reaction. 5′ dGCC** CGTGTGGGCAAGAG 3′High purity by HPLC The synthesis of ras gene fragments, the development of LTR in mammalian cells, and the introduction of LTR into NIH 3T3 cells are all important aspects of enzyme reaction. The result is that the base of the gene contains ras, and the formation of the gene is observed This is the first time that a gene has been activated. In addition, the gene expression of ras gene was increased by PCR(Polymerase Chain Reaction), and the gene expression of ras gene was adjusted by DNA extraction. As a result, the base part is modified, and the adjacent part is modified. In this study, we found that the possibility of inducing cancer in mammalian cells is very clear.