腫瘍関連遺伝子のゲノム(不)安定性に対する影響

肿瘤相关基因对基因组的影响（不稳定性）

基本信息

批准号：
20012001
负责人：
紙谷浩之
金额：
$ 4.48万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20012001/
关键词：
腫瘍関連遺伝子ゲノム(不)安定性 8-hydroxyguanine 組換え p53 Rb

项目摘要

1酸化損傷塩基誘発変異への影響評価:8-hydroxyguanine(酸化損傷塩基)を含むオリゴヌクレオチドを合成し精製した。このオリゴヌクレオチドを用いて損傷塩基を部位特異的に含むプラスミドDNAを作製し、様々な腫瘍関連遺伝子をノックダウンした細胞に導入した。その結果、DNAポリメラーゼη及びζ、OGG1、MUTYH、NTH、NEIL1が8-hydroxyguanineによる変異誘発を効果的に抑制していることを見出した。一方、BRCA1、BRCA2のノックダウンの効果は観察されなかった。また、腫瘍関連ヘリカーゼ(WRN、BLM、REQL4)ノックダウン実験においては、REQL4のノックダウンにより変異率が上昇する傾向が見出された。2酸化損傷ヌクレオチド誘発変異への影響評価:酸化損傷ヌクレオチド8-hydroxy-dGTPを様々な腫瘍関連遺伝子をノックダウンした細胞に導入した。その結果、MTH1、MTH2、NUDT5がヌクレオチドプール中の8-hydroxy-dGTP濃度を低下させて、変異の誘発を効果的に抑制していることを見出した。一方、MUTYHは、8-hydroxy-dGTPが誘発する変異を促進していることが明らかとなった。3組換え頻度への影響評価:直線化プラスミドを用いる新規組換え頻度評価システムにより、腫瘍関連遺伝子の影響を評価した。その結果、BRCA1、BRCA2のノックダウンの効果は観察されなかった。

评估对1氧化损伤碱诱导的突变的影响：含有8-羟基鸟嘌呤（氧化损伤基碱）的寡核苷酸均合成并纯化。该寡核苷酸用于生成含有特定于位点特异性碱基的质粒DNA，并将各种与肿瘤相关的基因引入敲击细胞中。结果，我们发现DNA聚合酶η和ζ，Ogg1，mutyh，nth和Neil1有效地通过8-羟基鸟嘌呤抑制了诱变。另一方面，未观察到BRCA1或BRCA2的敲低影响。此外，在与肿瘤相关的解旋酶（WRN，BLM，REQL4）敲低实验中，发现了由于REQL4敲低而增加突变率的趋势。评估对2-氧化受损的核苷酸诱导的突变的影响：氧化损坏的核苷酸8-羟基-DGTP被引入已击落各种肿瘤相关基因的细胞中。结果，我们发现MTH1，MTH2和NUDT5在核苷酸池中降低了8-羟基-DGTP浓度，并有效地抑制了突变的诱导。同时，已经揭示了mutyh促进了8-羟基-DGTP诱导的突变。 3。对重组频率的影响：使用线性化质粒使用新型的重组频率评估系统评估肿瘤相关基因的影响。结果，未观察到BRCA1或BRCA2的敲低影响。