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5-メチルシトシンの酸化による突然変異誘発に関する研究

5-甲基胞嘧啶氧化诱变研究

基本信息

批准号：
13214005
负责人：
紙谷浩之
金额：
$ 2.43万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13214005/
关键词：
5-メチルシトキン活性酸素 5-フォルミルシトシン C→T変異

项目摘要

本研究は、腫瘍抑制遺伝子p53の突然変異(C→T変異)のホットスポットは、シトシンのメチル化部位としても知られているCpG部位に存在する。本研究では、このC→T変異が、5-メチルシトシンの酸化産物の一つである、5-フォルミルシトシンの生成により誘発されたものである、という作業仮説を検証することを目的とした。5-フォルミルシトシンの前駆体(5-(1,2-dihydroxyethyl)cytosine)のフォスフォロアミタイト体を数ステップにより合成した。得られたフォスフォロアミダイト体をビルディングブロックとし、DNA合成機を用いてオリゴヌクレオチドの固相合成を行った。得られた前駆体オリゴヌクレオチドを、逆相C18カラム、逆相C18 HPLC、陰イオン交換 HPLCを用いて精製した。さらに、前駆体オリゴヌクレオチドをNalO_4による酸化により5-フォルミルシトシンを含むオリゴヌクレオチドへと誘導し、逆相C18 HPLC、陰イオン交換HPLCを用いて高純度に精製した。5-フォルミルシトシンを含むオリゴヌクレオチドを用いて、部位特異的に5-フォルミルシトシンを含むプラスミドDNAの構築を行った。サル由来のCOS-7細胞にトランスフェクションし、増殖したプラスミドDNAを分析した。その結果、5-フォルミルシトシンは変異誘発能が8-ヒドロキシグアニンを若干下回る程度であることが明らかになった。予想とは異なり、C→T変異以外の変異を主に誘発した。従って、CpG部位におけるC→T変異の原因は5-フォルミルシトシンではなく、他の5-メチルシトシンの酸化産物により誘発されたものであると推測された。

In this study, we investigated the presence of CpG sites in the C→T transition of tumor suppressor gene p53. This study aims to investigate the effects of C→T transition, 5-mer transition and acidification on the production of 5-mer transition. 5-(1,2-dihydroxy)cytosine, a precursor of 5-(1,2-dihydroxy)cytosine, was synthesized in a number of ways. The DNA synthesis engine is used to synthesize DNA. The product was purified by reverse phase C18 HPLC, reverse phase C18 HPLC and anion exchange HPLC. In addition, the precursor was purified by NalO_4, acidified by NalO_4, induced by NalO_4, and purified by reverse-phase C18 HPLC and anion exchange HPLC. The 5- COS-7 cells were analyzed for their DNA origin, proliferation, and proliferation. As a result, the 5-D transition can be induced by 8-D transition to a certain degree. I want to be different, C→T, and different. The reason for the C→T variation of CpG and CpG sites is that they are induced by the acidification products of 5-hydroxy-1-methyl-p-methyl-p-methyl-p