色素性乾皮症のDNA修復異常におけるATPaseQ1の役割と機能に関する研究

ATPaseQ1在着色性干皮病DNA修复异常中的作用及功能研究

• 批准号: 05857274
• 负责人: 宮島 敦子
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: 国立衛生試験所
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05857274/
• 关键词: DNA修復; 色素性乾皮症; DNAヘリカーゼ

ATPaseQ1は、色素性乾皮症(Xeroderma pigmentosum:XP)C群において変異が見い出されたATP依存性DNAへリカーゼで、遺伝子のクローニングが進められ、7つのDNA,RNAヘリカーゼモチーフを含む薬650アミノ酸からなる分子量73KDaの蛋白であることがわかった。またATPaseQ1遺伝子検索の結果、大腸菌の修復に関与する蛋白recQと高い相同性があることが示された。そこで本研究では、酵母におけるATPaseQ1遺伝子ホモローグのクローニングを以下のように進めた。(1)ATPaseQ1及びrecQ遺伝子において相同性が特に高いヘリカーゼモチーフ部分のアミノ酸配列から、20-25merのprimerをいくつかデザイン、合成した。(2)このprimerを用い酵母(RAY,YpH)DNAをtemplateとしてPCR法によりホモローグに相当する遺伝子を増幅させた。(3)電気泳動によりバンドを分離、グルより回収し、vectorに組み込み、大腸菌にtransformした。vectorにinsertを含むような大腸菌を増やしinsertのsequencingを行った。(4)その結果、ATPaseQ1遺伝子のヘリカーゼモチーフIからVIの部分に相当する618bp(202a.a)のホモローグ遺伝子を捕ることができた。この遺伝子はATPaseQ1とアミノ酸レベルで50%程度の相同性があり、ホモロジーサーチの結果、酵母の既知遺伝子ではなかった。現在このホモローグ遺伝子の全シークエンスを決定するため、サザン法により酵母の遺伝子ライブラリーをスクリーニングしている。またそれと並行して遺伝子を破壊した酵母細胞株の作製を行なっている。

ATPaseQ1, Xeroderma pigmentosum (XP)C group C, ATP-dependent DNA,RNA,RNA, ATPaseQ1 gene detection results, E. coli repair and high protein identity In this study, the yeast ATPaseQ1 gene was used to detect the following genes. (1)ATPaseQ1 and recQ gene identity, especially high in the middle of the middle. (2)This primer is used in yeast (RAY,YpH)DNA template and PCR method. (3)Electrophoresis, separation, recovery, vector assembly, and coliform vector insert sequence (4)As a result, ATPaseQ1 gene fragments were identified by the 618bp(202a.a) fragment. This gene is ATPaseQ1 and 50% identical to the original gene. Now, the whole process of yeast production is determined by the method of yeast production. The yeast cell line was produced in the same way as the yeast cell line.