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色素性乾皮症原因遺伝子産物によるゲノム損傷認識とその制御機構

着色性干皮病致病基因产物对基因组损伤的识别及其控制机制

基本信息

批准号：
20012032
负责人：
菅澤薫
金额：
$ 5.95万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20012032/
关键词：
ヌクレオチド除去修復色素性乾皮症 UV-DDB アセチル化

项目摘要

精製したヒストンアセチル化酵素(HAT) CBP/p300がUV-DDBと相互作用し、DDB2をアセチル化することを昨年度までに明らかにした。このDDB2の修飾部位を質量分析によって解析したところ、少なくともin vitroにおいてはN末端の40アミノ酸を含む領域に存在する7か所のリジン残基がアセチル化の標的となる可能性が示唆された。そこでヒト正常線維芽細胞WI38 VA13を親株として、このN末端領域を欠失した変異DDB2を安定に過剰発現する形質転換細胞株を樹立した。野生型DDB2の過剰発現により細胞の紫外線抵抗性が顕著に増強されたのに対して、N末端欠失DDB2を過剰発現する細胞株ではこの効果が明らかに減弱していた。一方、野生型DDB2は細胞の紫外線照射に伴ってCUL4リガーゼによるユビキチン化、およびプロテアソームによる分解を受けることが知られているが、N末端欠失DDB2は紫外線照射に応答した分解を受けにくいことが示された。以上の結果より、アセチル化部位として同定されたDDB2のN末端領域がユビキチン化の標的にもなっており、両者が共通のリジン残基を競合する可能性があること、またこの領域がDDB2タンパク質の安定性や細胞の紫外線感受性の制御において重要な役割を果たしている可能性が示唆された。現在、N末端欠失DDB2を含むUV-DDBを組換えタンパク質として精製し、in vitroでユビキチン化の基質となるかどうかを検討すると共に、7か所のリジン残基を非アセチル化体(アルギニン)、あるいはアセチル化模倣体(グルタミン)で置換した変異DDB2を作成し、その機能解析を進めている。

Purified CBP/p300 for UV-DDB interaction, DDB2 for degradation The modification site of this DDB2 was analyzed by mass analysis, and this suggests that there are at least 7 residues in the N-terminal 40-amino acid containing region that may be the target of localization. The normal line WI38VA13 was established as a morphologically altered cell line, which was not stable in the N-terminal domain. The expression of wild-type DDB2 increased the UV resistance of the cells, while the expression of N-terminal DDB2 decreased. A wild type DDB2 cell is exposed to UV radiation, and the N-terminal DDB2 cell is exposed to UV radiation, and the N-terminal DDB2 cell is exposed to UV radiation. The above results show that the N-terminal domain of DDB2 is likely to be the target of a complex transformation, and the common residue of DDB2 is likely to be the target of a complex transformation. Now, N-terminal deletion of DDB2 includes UV-DDB conversion, purification, in vitro transformation of matrix, analysis of total, 7 residues of DDB2 conversion, and functional analysis of DDB2 conversion.

项目成果

期刊论文数量（20）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Fluorescence correlation spectroscopy of the binding of nucleotide excision repair protein XPChHr23B with DNA substrates

核苷酸切除修复蛋白 XPChHr23B 与 DNA 底物结合的荧光相关光谱

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
J. Fluoresc
影响因子：
0
作者：
Roche;Y.;Zhang;D.;Segers-Nolten;G. M.;Vermeulen;W.;Wyman;C.;Sugasawa;K.;Hoeijmakers;J.;and Otto;C.
通讯作者：
C.

ヌクレオチド除去修復におけるDNA損傷認識の分子機序

核苷酸切除修复中DNA损伤识别的分子机制

DOI：
发表时间：
2008
期刊：
影响因子：
0
作者：
T. Nakamura;S. Meshitsuka;S. Kitagawa;N. Abe;J. Yamada;T. Ishino;H. Nakano;T. Tsuzuki;T. Doi;Y. Kobayashi;S. Fujii;M. Sekiguchi vY. Yamagata;高城順一，金子哲，S. Sijia，高井和之，木口学，榎敏明，山田健郎，畠賢治，石井孝文，京谷隆;T.Irifune;Jun Akimitsu;菅澤薫
通讯作者：
菅澤薫

DNA damage recognition coordinated by the multiple xeroderma pigmentosum gene products

由多种着色性干皮病基因产物协调的 DNA 损伤识别