Biochemische Charakterisierung der Interaktion von indirekten und direkten Thymidylatsynthaseinhibitoren mit Topoisomerase-I interaktiven Substanzen als Grundlage einer klinischen Therapieoptimierung

胸苷磷酸酶直接抑制剂（Z. B.雷替曲塞）和拓扑异构酶-I相互作用物质（z.B. CPT-11）在单药治疗中的作用是巩固肿瘤的抗肿瘤活性。CPT-11与5-FU体外和体内联合应用具有协同毒性作用。这些临床数据可以在许多临床病例中找到韦尔登。在制备韦尔登的实验中，发现TS-抑制剂与拓扑异构酶-I的相互作用具有协同增效作用，其作用机理是通过对底物（HT 29，HCT 8）的显色来实现的。Topo-I相互作用对Topo-I和Topo-II的mRNA表达、可切割复合物的形成和DNA片段化的影响。通过Topo-I的交互作用，我们可以对直接还原叶酸载体的TS-抑制剂进行筛选，筛选出TS-抑制剂的多聚谷氨酸、TS-表达、TS-抑制、DNA-诱导和通过TS-抑制剂的筛选后的Zellzyklenregulation进行评价韦尔登。

Direkte Thymidylatsynthase-Inhibitoren (z.B. Raltitrexed) und Topoisomerase-I interaktive Substanzen (z.B. CPT-11) zeigen in der Monotherapie bei soliden Tumoren eine gute antitumorale Aktivität. Die Kombination von indirekten TS-Inhibitoren (5-FU) mit CPT-11 zeigt in vitro und in vivo bei kolorektalen Karzinomen eine synergistische zytotoxische Wirkung, wenn CPT-11 vor 5-FU appliziert wird. Diese präklinischen Daten konnten bereits in mehreren klinischen Studien umgesetzt werden. Im Rahmen des beantragten Projektes soll untersucht werden, ob eine Kombination von direkten TS-Inhibitoren mit Topoisomerase-I interaktiven Substanzen ebenfalls einen synergistischen Wirkmechanismus gegenüber kolorektalen Karzinomzelllinien (HT29, HCT8) aufweist. Einflüsse der Topo-I interaktiven Substanzen auf die mRNA-Expression von Topo-I und -II, cleavable complex formation und DNA-Fragmentierung nach Vorbehandlung mit TS-Inhibitoren soll Gegenstand der Untersuchungen sein. Ebenso soll nach Vorbehandlung mit Topo-I interaktiven Substanzen die zelluläre Aufnahme der direkten TS-Inhibitoren mittel reduziertem Folatcarrier, die zelluläre Polyglutamierung der TS-Inhibitoren, die TS-Expression, TS-Inhibition, Induktion von DNA-Schäden und Veränderungen der Zellzyklenregulation nach Applikation von TS-Inhibitoren evaluiert werden.