Biochemische Charakterisierung einer Mutante der Bakteriophagen lambda Integrase

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Sequenz-spezifische DNA Rekombination spielt eine wichtige Rolle in fundamentalen biologischen Prozessen, die z.B. die Kontrolle der DNA Replikation in Prokaryonten und die Bildung der Antikörper in höheren Eukaryonten einschließen. Das Rekombinationssystem des Bakteriophagen l ist verantwortlich für die Integration und die Excision des Phagengenoms in das bzw. aus dem E. coli Wirtszellgenom. Es erlaubt eine stringente Kontrolle dieser Reaktion durch eine Beteiligung von Ko-Faktoren. Die DNA Strangaustauschreaktionen werden von der phagenkodierten Integrase als eigentliche Rekombinase katalysiert. In dem geplanten Vorhaben soll eine in meinem Labor generierte Integrase Mutante biochemisch charakterisiert werden. Die Mutante ist ohne Ko-Faktoren aktiv und zeichnet sich durch eine im Vergleich zur wild-typ Integrase veränderte Direktionalität der von ihr in vivo katalysierten Rekombinationsreaktionen aus. Ein tieferes Verständnis des molekularen Mechanismus der von dieser außergewöhnlichen Mutante katalysierten Rekombination würde einen wichtigen Beitrag zur Erforschung der Funktionsweise von Nukleoproteinkomplexen in Rekombination und anderen DNA Transaktionen leisten. Darüber hinaus würde uns dieses Verständnis helfen, die Anwendung dieser Mutante in menschlichen Zellen zu verbessern.