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エピトープ特異性抗ヒトCYP3A抗体の作製とヒトにおける分子多型の解析

表位特异性抗人 CYP3A 抗体的生成和人类分子多态性分析

基本信息

批准号：
06772214
负责人：
宮田昌明
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06772214/
关键词：
CYP3A4 CYP3A5 抗オリゴペプチド抗体分子多型

项目摘要

CYP3A4およびCYP3A5を特異的に識別する抗オリゴペプチド抗体を作製するために、それぞれのアミノ酸配列から特異的配列のペプチドを合成した。BSAに上記のペプチドを結合させ抗原とし常法に従い兎に免疫し、抗体を作製した。一方すでに単離しているCYP3A4およびCYP3A5cDNAをCOS-1細胞にトランスフェクションし、CYP3A4およびCYP3A5を発現したCOS-1細胞を作製し、ミクロゾームを調整した。これらのミクロゾームにCYP3A4およびCYP3A5が発現していることを抗CYP3A2抗体により確認した。これらのミクロゾームを用い、作製した抗ペプチド抗体の特異性等について検討したところ、抗CYP3Aペプチド抗体についてはCYP3A4特異的に反応し、CYP3A5とは反応しないことが示された。一方、抗CYP3A5ペプチド抗体については、特異性は認められなかった。次に抗CYP3A4ペプチド抗体がミクロゾーム中のCYP3A4の活性を阻害することができるかどうか、テストステロン6β-水酸化活性を測定することにより検討したが、活性阻害は認められなかった。抗CYP3A4ペプチド抗体はCYP3A4にのみ特異的に反応することより、ヒト肝におけるCYP3A4の含量を測定したところ有意な個体差が認められ、CYP3A4のタンパクレベルでの多型の存在が示唆された。現在異なる部位のペプチドを合成し、活性を阻害することができる特異抗体の作製を試みている。

CYP3A4 and CYP3A5 are specific for the production of anti-retroviral antibodies. BSA is a highly sensitive, sensitive, and sensitive antibody. CYP3A4 and CYP3A5 cDNAs were expressed in COS-1 cells and regulated in COS-1 cells. CYP3A4 and CYP3A5 were detected and identified by anti-CYP3A2 antibodies. The anti-CYP3A4 specific antibody was detected by the anti-CYP3A5 antibody. Anti-CYP3A5 antibody is specific and anti-CYP3A5 antibody is specific. Anti-CYP3A4 antibodies inhibit CYP3A4 activity in a variety of cultures. Anti-CYP3A4 antibodies were used to detect CYP3A4 levels in CYP3A4 specific antibodies, and the presence of CYP3A4 polymorphisms was also detected. Now the different parts of the site of synthesis, activity inhibition, and so on, the production of specific antibodies to try.