ビタミンD_3代謝酵素の分子生物学的研究(25-ヒドロキシビタミンD_323-水酸化酵素の同定)

维生素D_3代谢酶的分子生物学研究（25-羟基维生素D_323-羟化酶的鉴定）

• 批准号: 06780507
• 负责人: 大山 義彦
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780507/
• 关键词: ビタミンD_3; 活性型ビタミンD_3; チトクロムP-450; 25-ヒドロキシビタミンD_3 24水酸化酵素; 25-ヒドロキシビタミンD_3 23水酸化酵素; 酵素誘導; ビタミンDレセプター

ラットでは,25-ヒドロキシビタミンD_324-水酸化酵素は活性型ビタミンD_3(1,25(OH)_2D_3)により著しく誘導される。そのメカニズムとして,1,25(OH)_2D_3がビタミンDレセプター(VDR)に結合した後,RXRとダイマーを形成し,それがプロモーター領域にあるビタミンDレスポンスエレメント(VDRE)に結合し転写を活性化することを明らかにした。この24-水酸化活性はラット,マウスで顕著であり,モルモットなどの動物種では23-水酸化活性が認められ24-水酸化活性は非常に低い。しかし,2つの酵素の誘導,生理的役割と,チトクロムP-450の酵素の性質を考え合わすと,2つの酵素は同じファミリーである可能性が高い。そこで,24-水酸化酵素のcDNAを用いて23-水酸化酵素cDNAライブラリーをスクリーニングした。4週齢のモルモットに2.5μg/日の1,25(OH)_2D_3を2日連続投与し,腎臓からmRNAを調製した。ラットのcDNAのコーディング領域をプローブとしnorthernblottingを行った結果,ラットより僅かに小さい3.2kbのバンドが検出できた。したがって,モルモットにもラットの24-水酸化酵素と相同性を持つ遺伝子が存在することが明らかとなった。さらに,このmRNAは活性型ビタミンD投与により誘導されることから,モルモットの24-,または23-水酸化酵素であることが期待される。そこで,クローニングためにmRNAのサイズ分画を行い,oligo(dT)プライマーによりcDNAを合成しλgt10を用いライブラリーを作製した。およそ30万のプラークをスクリーニングしたところ,6つのポジティブシグナルが得られた。しかし,これらのクローンのインサートサイズは0.9〜1.2kbpとnorthernblottingから予想されたものより小さかった。現在,この6つのロリーンの塩基配列の決定,新たにランダムプライマーを用いたcDNAライブラリーの作製,5´-RACE法を進めている。

D324-hydrolyzyme active enzyme D3 (1meme25 (OH) _ 2D_3) was used to guide the growth of the animal. After the combination of 1 OH 25 (OH) _ 2D_3 communication system (VDR), the RXR communication system was formed, and the activation information was obtained by the combination of the active information. The activity of water acidification is very low, and the activity of water acidification is very low. There is a high probability that the enzyme activity is the same as that of the enzyme, which is similar to that of the enzyme. CDNA, 24-hydro-acidified enzyme. Use the 23-hydrated acidified enzyme cDNA. 1 OH 25 (OH) _ 2D_3 on the 2nd day, please contact me, please contact me, please mRNA me. Please check the results of the cDNAs

项目成果

大山義彦: "ビタミンD作用と代謝に関わる遺伝子とその異常" Clinical Calcium 3月号 骨病変と遺伝子異常 医薬ジャーナル社. 17-22 (1995)

小山义彦：“与维生素 D 作用和代谢相关的基因及其异常”临床钙三月号骨病变和遗传异常 Iyaku Journal Inc. 17-22 (1995)

須田立雄: "Differences of the regulation of 24-hydroxylase gene expression in the kidney and intestin." Vitamin D;proceeding of the Ninth workshop on Vitamin D,Walter de Gruyter. 113-121 (1994)

Tatsuo Suda：“肾脏和肠道中 24-羟化酶基因表达的调节差异”；第九届维生素 D 研讨会论文集，Walter de Gruyter 113-121 (1994)。

西村篤: "Regulation of messenger ribonucleic acid expression of H,25-dihydroxyvitamin D_3-24-hydroxylase in Rat osteoblasts." Endocrinology. 134. 1794-1799 (1994)

Atsushi Nishimura：“大鼠成骨细胞中 H,25-二羟基维生素 D_3-24-羟化酶的信使核糖核酸表达的调节。”134。1794-1799 (1994)

大山義彦: "ラットのビタミンD24-水酸化酵素遺伝子プロモーター領域のビタミンDレスポンスエレメントの機能解析" 第10回ビタミンDワークショップ プログラム抄録集. 20-21 (1994)

Yoshihiko Oyama：“大鼠维生素 D24 羟化酶基因启动子区域维生素 D 反应元件的功能分析”第 10 届维生素 D 研讨会计划摘要 20-21 (1994)。

秋吉恵: "Further oxidation of hydroxycalcidiol by calcidiol 24-hydroxylase" Eur.J.Biochem.224. 335-343 (1994)

Megumi Akiyoshi：“通过骨化二醇 24-羟化酶进一步氧化羟基骨化二醇”Eur.J.Biochem.224 (1994)。