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ビタミンD_3の代謝活性化に関与する酵素の機能と構造

维生素D_3代谢活化酶的功能和结构

基本信息

批准号：
63570872
负责人：
大山義彦
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ビタミンD_325水酸化酵素は、肝臓のミクロゾーム画分とミトコンドリアに存在している。当研究室の林らは、雄ラットミクロゾームから活性を指標とし、本酵素(P-450cc25)を精製した。最終標品は、電気泳動上単一バンドにもかかわらず、雄特異的なP-450_<M-1>が有するテストステロンの2α16α位の水酸化活性を示した。この標品が単一であるか否かを、異なるエピトープを認識する3種のモノクローナル抗体を用い検討したところ、両活性は、免疫化学的には識別できないことが判明した。そこで、P-450M-1のcDNAの発現と酵母菌を用いて行った。発現したP-450は、テストステロンの水酸化活性のみを示し、ビタミンD_325水酸化活性は認められなかった。異常のことから、ビタミンD_325水酸化酵素は、P-450_<M-1>と、一次構造上は異なるが、免疫化学的性質は類似しているP450であることが判明した。一方、雌ラットミクロゾームには、P-450cc25とは、カラム挙動、免疫化学的にも全く異なる25水酸化酵素が存在することを見い出した。ミトコンドリアの25水酸化酵素は舛本らが、雌ラットより電気泳動上単一バンドにまで精製した。本酵素活性は、精製過程で、3α、7α、12α、コレスタントリオール27水酸化活性と同一の挙動を示し、最終標品はこれらの生理的意義の異なる2種の水酸化反応を触媒した。この標品の単一性を確かめるために、部分失活、阻害など酵素化学的に検討した結果、両活性が単一酵素によることが示唆された。しかし、ONAレベルでの検討が必要であると考えている。D_3の活性化の次の段階の腎臓での水酸化酵素のうち、25-ハイドロキシビタミンD_324水酸化酵素の抗体をマウスより得ることに成功し、さらにモノクローナル抗体の作製を行っている。抗体がそろい次第、他の水酸化酵素との相異について検討する。また、CDNAライブラリーのスクリーニングが可能となった。

D_325 Hydroacidifying enzyme is present in the liver. The enzyme (P-450cc25) was purified when the activity index of the enzyme was determined. The final standard shows the acidification activity at position <M-1>2α16α of P-450_with the highest activity at the end of electromigration. This standard is recognized by three different kinds of antibodies, one by one, and one by one by one. Expression of cDNA of P-450M-1 and its expression in yeast. P-450 is the first to show its acidifying activity, while D_325 is the first to show its acidifying activity. Anomaly, P325, <M-1>p450, p450. One side, female sex, P-450cc25, female sex, female The 25-hydroxy-acidifying enzyme in the enzyme is purified by electroporation. The activity of this enzyme is 3α, 7α, 12α, 27, 28, 29, 2 This standard has a single property, partial inactivation, inhibition, enzyme chemistry, and results. It is necessary to discuss the problem of ONA. D_324 hydration enzyme antibody was successfully prepared by the method of 25-D_3 hydration enzyme antibody production. The antibody is divided into different levels, and the other hydrating enzymes are different. CDNA can be used to detect and detect the presence of DNA.